土壤碱性磷酸酶（soilalkalinephosphatase，S-AKP/ALP）活性测定试剂
盒
微量法100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转
化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效
磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
测定原理：
碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过苯酚与2,6-二溴苯醌氯
亚胺在碱性条件下显色，于660nm波长测定显色产物吸光度并结合苯酚标准品定量酚的生成量，即可计
算出S-AKP/ALP活性。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。（变
褐色后不能再使用）。
标准品：液体×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
需自备仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、96孔板、冰、蒸馏水、无水乙醇
和甲苯。
操作步骤：
一、催化反应
称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置
于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的
反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。
二、显色反应
1.酶标仪预热30min，调节波长到660nm。
试剂名称（μL）空白管标准管测定管
蒸馏水10--
标准品-10-
上清液--10
试剂三202020
试剂四444
充分混匀，显色后再加蒸馏水166μL，混匀后25℃静置30min，于660nm测定吸光度，空白管和标准
管只需测定一次。
酶活性计算公式：
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1μmol酚为1个酶活单位。
S-AKP/ALP（μmol/d/g土样）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W÷T
=0.725×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W
C标准液：0.5μmol/mL；V总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24
h=1d。
注意事项：
1.本法中，ΔA的范围为0.01~1.0，若小于0.01，可增加样本质量或适当延长反应时间；若大于1.0，
高于可使用蒸馏水对上清液进行稀释，最终计算结果需同步修改。
2.当催化反应所得上清液中苯酚生成浓度高于1mM时，需对上清液进行适当稀释；若浓度过高，
显色反应将无法完全进行，导致蓝色变浅甚至不显色，影响定量准确性。
关键字： 土壤碱性磷酸酶;土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性;
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