土壤谷氨酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
测定原理：
S-GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。
试剂组成和配制：
产品名称 | SSQ038-50T/48S | Storage |
试剂一：液体 | 8ml | 4℃ |
试剂二：粉剂 | 2瓶 | 4℃避光 |
试剂三：液体 | 30ml | 常温 |
试剂四：液体 | 10ml | 常温 |
试剂五：液体 | 6ml | 常温 |
试剂六：液体 | 6ml | 常温避光 |
说明书 | 一份 |
试剂二临用前每瓶加入10ml蒸馏水充分溶解备用，现配现用。
自备仪器和用品：
台式离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2、样品测定（在EP管中加入下列试剂）；
试剂名称（μl） | 测定管 | 对照管 |
样本 | 0.1 |
|
甲苯 | 25 | 25 |
振荡混匀，室温放置15min；
混匀，37℃水浴2 小时
混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，依次加入下列试剂
上清液 | 650 | 650 |
试剂四 | 150 | 150 |
试剂五 | 100 | 100 |
试剂六 | 100 | 100 |
混匀，室温静置15min，420nm处读取测定管和对照管吸光值，
计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。
注意事项:
试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
酶活性计算：
标准条件下测定的回归方程为y = 3.8488x +0.0057；x为标准品浓度（μmol/ml），y为吸光值A。
单位定义：每g土样每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS（nmol/min/g 土样）=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反总÷W÷T×1000
=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。
V反总：反应体系总体积：1.05ml；T：反应时间，2h=120min；W：样本质量，g; 1000，μmol到nmol换算系数。
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