ELISA试剂盒

产品信息

产品名称：ELISA 试剂盒

规格：96T（可拆）/48T

检测方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）

适用样本：血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆、尿液、脑脊液等

有效期：6 个月（未开封，2–8℃）；见外包装批号

储存条件：2–8℃避光保存；浓缩洗涤液可室温短期存放

实验原理

采用双抗体夹心 ELISA：

微孔板预包被抗单克隆抗体（捕获抗体）。

加入标准品 / 样本，抗原与固相抗体结合。

洗去未结合物，加入生物素化检测抗体，形成 “固相抗体–抗原–生物素化抗体” 复合物。

加入辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（SA–HRP）。

加TMB 底物显色；HRP 催化 TMB 生成蓝色产物。

加终止液（稀硫酸），蓝色转黄色；450 nm测 OD 值。

颜色深浅与样本中浓度成正比，由标准曲线定量。

所需设备与试剂（自备）

酶标仪（含 450 nm，推荐带 570/630 nm 校正）

洗板机（或手动洗板）

移液器（10 μL、100 μL、300 μL）及吸头

离心管、试管架、吸水纸

去离子水 / 蒸馏水（配洗涤液）

冰盒、37℃孵育箱

样本采集与保存

血清：静脉采血→室温凝固 30 min→1000×g 离心 10 min→取上清。

血浆：EDTA / 肝素抗凝→30 min 内 1000×g 离心 10 min→取上清。

细胞上清：培养结束→1000×g 离心 5 min→取上清，避免细胞碎片。

组织匀浆：预冷 PBS（pH7.2–7.4）制备 10% 匀浆→12000×g 离心 15 min→取上清。

保存：

2–8℃：≤48 h

–20℃：≤1 个月

–70℃：≤6 个月

避免反复冻融（≤2 次）

操作步骤（全程室温 20–25℃，严格控时）

1）加样（设复孔，推荐 2–3 复孔）

取出微孔板，标记：S0–S7、样本、空白、阳性对照。

每孔加100 μL 标准品 / 样本 / 对照；空白孔加 100 μL 稀释液。

加样至孔底，避免气泡、不溅出。

封板膜密封，37℃孵育 90 min。

2）洗板（关键！洗不干净背景高）

弃液，拍干（吸水纸上轻拍）。

每孔加300 μL 1× 洗涤液，浸泡60 s。

弃液、拍干；重复 4–5 次；末次尽量拍干。

3）生物素化抗体孵育

每孔加100 μL 抗体工作液。

换新封板膜，37℃孵育 60 min。

洗板：同上，4–5 次。

4）SA–HRP 孵育

每孔加100 μL SA–HRP 工作液。

封板，37℃避光孵育 30 min。

洗板：同上，5 次（尽量彻底）。

5）TMB 显色（避光！）

每孔加90 μL TMB 底物。

37℃避光显色 10–20 min（标准品呈清晰蓝色梯度即可）。

6）终止与读板（必须快！）

每孔加50 μL 终止液，轻晃混匀（蓝→黄）。

5 min 内酶标仪读数：450 nm；推荐570/630 nm 校正（降低背景）。

结果计算

计算复孔平均 OD 值，减去S0 空白 OD。

以标准品浓度（对数 X 轴）–OD 值（Y 轴）做四参数 Logistic 拟合（4PL），绘制标准曲线。

样本 OD 代入曲线，得浓度；样本超出曲线上限时，用稀释液稀释后重测，结果 × 稀释倍数。

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