小鼠原代细胞 新品

产品概述

• 有限传代（一般 P0–P3，之后增殖变慢、衰老）

• 保留体内组织特异性功能（如肝细胞代谢、内皮管形成、神经元电活动）

• 无致瘤性，适合毒性筛选、分化、基因功能、共培养等实验

• 细胞活力：复苏后活率 ≥ 85%–90%

• 浓度：(1–5)×10⁶ 细胞 / 管（冻存）

• 保存条件：** 液氮（-196℃）** 长期保存；-80℃不建议长期存放（≤1 个月）

• 运输：液氮干冰运输 / 吸附式液氮罐运输

• 基础培养基：DMEM / RPMI 1640 / MEM（依细胞类型）

• 血清：10%–20% 胎牛血清（FBS），原代建议 15%–20%

• 双抗：100 U/mL 青霉素 + 100 μg/mL 链霉素

• 附加（可选）：L - 谷氨酰胺、HEPES、丙酮酸钠、专用添加剂（如 B27、肝细胞添加剂）

• 培养环境：37℃、5% CO₂、饱和湿度

• 包被（推荐）：I 型胶原 / 明胶 / 多聚赖氨酸包被培养板（尤其内皮、神经元、肝细胞）

1. 无菌准备

• 超净台紫外消毒 30 min；器械高压灭菌；75% 酒精消毒台面

2. 动物处理与取材

1. 小鼠颈椎脱臼安乐死；75% 乙醇浸泡 1–2 min 消毒体表。

2. 无菌条件下快速取目标组织（皮肤、肝、肺、脑、胚胎等），置于预冷无菌 PBS/Hank’s 液中。

3. 去除脂肪、包膜、血管、血块等杂质；用预冷 PBS 洗 2–3 次。

3. 剪碎与消化

1. 组织剪切成 1 mm³ 小块（米粒大小）。

2. 加入 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA（或专用消化酶：胶原酶 Ⅰ/Ⅳ、分散酶），37℃ 消化 15–30 min，每 5 min 轻摇混匀。

3. 加入含血清完全培养基终止消化（血清中和胰酶）。

4. 过滤、离心、接种

1. 用 100–200 μm 细胞筛过滤，去除未消化组织块。

2. 滤液 180–300 g 离心 5 min，弃上清。

3. 完全培养基重悬细胞，计数；按 (3–5)×10⁵ 细胞 /cm² 接种于包被培养瓶 / 皿。

4. 置于 37℃、5% CO₂ 培养箱；24 h 后换液，去除未贴壁细胞与碎片。

1. 细胞汇合度达 70%–80% 时传代（原代避免长满）。

2. 弃旧培养基，无菌 PBS 洗 2 次。

3. 加入 0.25% 胰酶 - EDTA（T25 瓶约 2 mL），37℃ 消化 2–5 min，镜下见细胞变圆、开始脱落。

4. 轻敲瓶壁，加完全培养基终止消化，吹打成单细胞悬液。

5. 180–300 g 离心 5 min，弃上清，新鲜培养基重悬。

6. 按 1:2–1:3 分瓶接种，补足量培养基，放回培养箱。

• 注意：原代细胞传代次数有限，建议 P0–P2 用于实验，避免多次传代导致分化丢失、衰老。

1. 冻存（对数生长期、活率 >90%）

1. 常规消化、离心收集细胞。

2. 预冷冻存液：90% 完全培养基 + 10% DMSO（或无血清冻存液）。

3. 调整细胞浓度 (5–10)×10⁶ 细胞 /mL，分装冻存管，每管 1 mL。

4. 程序降温：4℃ 30 min → -20℃ 1–2 h → -80℃ 过夜 → 转入液氮长期保存。

2. 复苏

1. 液氮中取出冻存管，37℃ 水浴快速融化（1–2 min），轻柔摇晃。

2. 75% 酒精擦拭管身，超净台内操作。

3. 细胞悬液缓慢滴入含 5–10 mL 完全培养基的离心管中，稀释 DMSO 毒性。

4. 180 g 离心 5 min，弃上清，新鲜培养基重悬、计数。

5. 按 (3–5)×10⁵ 细胞 /cm² 接种，24 h 后换液。