大鼠原代细胞 新品

产品基本信息

原代分离制备流程

1. 大鼠麻醉处死，75% 乙醇全身消毒体表

2. 无菌操作快速摘取目标组织，预冷无菌 PBS 洗净血迹、筋膜、脂肪及坏死组织

3. 无菌器械将组织剪碎至1 mm3匀质小块

4. 加入适配消化液（0.25% 胰酶、Ⅰ/Ⅱ/Ⅳ 型胶原酶），37℃水浴震荡消化 15~40 min

5. 加入含血清完全培养基终止消化，轻柔吹打分散细胞

6. 无菌细胞筛过滤除去组织残渣，低速离心弃上清

7. 新鲜完全培养基重悬细胞，计数后接种培养

8. 培养 24h 首次换液，去除死细胞与未贴壁悬浮杂质

细胞传代操作规范

1. 细胞汇合度达70%~80% 即可传代，禁止长满密铺

2. 弃旧培养液，无菌 PBS 漂洗细胞 2 次

3. 加入适量胰酶消化液，37℃孵育，镜下见细胞皱缩变圆即刻终止消化

4. 加入完全培养基吹打制成单细胞悬液

5. 低速离心收集细胞，弃上清重悬，按1:2~1:3比例分瓶接种

6. 补足培养基后放入培养箱常规培养

   重点：大鼠原代细胞耐消化性弱，缩短消化时长，尽量低代次完成实验

细胞冻存操作

1. 选取活力旺盛对数生长期细胞，常规消化离心收集

2. 冻存液配比：90% 完全培养基 + 10% DMSO，也可使用无血清通用冻存液

3. 调配细胞浓度：5×105∼1×106 个/mL，每冻存管分装 1mL

4. 梯度降温：4℃静置 30 min → -20℃放置 1~2 h → -80℃冰箱过夜

5. 次日转入液氮罐长期密闭保存

细胞复苏步骤

1. 取出冻存管，立即置于37℃水浴快速晃动，1 min 内完全融化

2. 75% 酒精擦拭管壁灭菌，移入超净台操作

3. 细胞悬液缓慢加入足量完全培养基稀释，降低 DMSO 毒性

4. 离心弃上清，更换新鲜完全培养基重悬混匀

5. 均匀接种培养瓶，静置培养，24 h 更换全新培养液

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