原代细胞 新品

技术参数

1. 细胞存活率：复苏后活率≥90%

2. 细胞纯度：目的细胞纯度≥95%

3. 安全检测：细菌、真菌、支原体、衣原体阴性；人体常见病毒筛查阴性

4. 适用代次：P0-P2 代使用最佳，P3 代开始衰老、功能下降

5. 推荐接种密度：3∼6×105 cells/cm2

标准培养条件

1. 完全培养基：人原代细胞专用完全培养基

2. 血清：10%~20% 特级胎牛血清，部分上皮 / 神经细胞需专用无血清添加剂

3. 添加组分：青霉素 - 链霉素双抗、L - 谷氨酰胺、HEPES、细胞生长因子

4. 培养环境：37℃、5% CO₂、饱和湿度

5. 包被处理：内皮、上皮、神经类细胞建议明胶、多聚赖氨酸、胶原蛋白预包被培养容器

原代分离方法

1. 无菌获取人体新鲜组织，预冷无菌 PBS 反复冲洗去除血污与杂质

2. 剔除脂肪、结缔组织、坏死组织，无菌剪剪碎至1 mm3组织碎块

3. 选用适配消化液：胰蛋白酶、Ⅰ/Ⅱ/Ⅳ 型胶原酶、分散酶，37℃恒温轻柔消化

4. 血清终止消化，无菌筛网过滤，去除未消化组织块

5. 低速离心收集细胞，弃上清，完全培养基重悬

6. 计数后接种培养，12~24h 首次换液，清除死细胞与漂浮杂质

细胞传代操作规程

1. 细胞汇合度达70%-80% 及时传代，严禁满瓶长满

2. 弃培养液，无菌 PBS 清洗细胞 2 次

3. 加入胰酶消化液，37℃短时消化，镜下细胞变圆即终止

4. 加入完全培养基吹打混匀制成单细胞悬液

5. 离心收集细胞，新鲜培养基重悬，按1:2~1:3分瓶接种

6. 置于培养箱常规培养

   注意：人原代细胞活力偏弱，耐受消化能力差，尽量减少传代次数

细胞冻存

1. 选取状态优良对数生长期细胞消化收集

2. 冻存液配方：90% 完全培养基 + 10% DMSO

3. 调整细胞浓度：5×105∼1×106 cells/mL，每管 1mL 分装

4. 梯度降温：4℃30min→-20℃1.5h→-80℃过夜

5. 转入液氮长期保存

细胞复苏流程

1. 冻存管取出后迅速放入37℃水浴快速融化，1min 内融完

2. 酒精消毒管壁，超净台内操作

3. 细胞悬液加入大量完全培养基稀释去除 DMSO

4. 离心弃上清，换新培养液重悬接种

5. 静置培养，24h 更换新鲜完全培养基

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