商品属性:
产品名称 | 人磷脂酸磷酸酶2C(PPAP2C)重组蛋白 | 型号 | YS-DB2795 |
物种 | Homo sapiens (Human,人) | 用途 | 仅供科研实验 |
型号:YS-DB2795
产品名称:人磷脂酸磷酸酶2C(PPAP2C)重组蛋白
物种:Homo sapiens (Human,人)
英文名称:Recombinant Phosphatidic Acid Phosphatase Type 2C (PPAP2C)
PPAP2-C; LPP2; PAP-2c; PAP2-g; Lipid phosphate phosphohydrolase 2; Phosphatidate phosphohydrolase type 2c
酶与激酶
物种:Homo sapiens (Human,人)
来源:原核表达
宿主E.coli
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位::细胞膜
预测分子量:48.1kDa
实际分子量:48kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Met1~Leu162 with N-terminal His and GST Tag
缓冲液成份:磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性状:冻干粉
纯度:> 95%
等电点:8.6
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
核心参数:
适配磷脂酸代谢调控分析、体外酶动力学实验、脂信号分子稳态研究及靶向小分子筛选实验。
基础核心参数
基因 ID:23593;PPAP 家族同工酶;膜结合脂质磷酸酶;分子量约 32 kDa。
核心功能
质膜局部降解磷脂酸,终止 PLD 来源脂质信号,限制过度迁移信号传导。
调控角质形成细胞脂质屏障合成,维持皮肤表皮屏障完整性。
使用方法:
1. 蛋白复溶
解冻:从低温冰箱取出蛋白后,立即置于冰上缓慢解冻,避免室温放置导致蛋白变性。
缓冲液选择:根据蛋白特性选择合适的复溶缓冲液,常用基础缓冲液为10-50mM Tris-HCl(pH7.0-8.0)或PBS(pH7.2-7.4);部分蛋白需添加100-300mM NaCl维持渗透压,或添加1-5mM DTT、β-巯基乙醇等还原剂保持蛋白稳定性。
复溶操作:根据蛋白浓度,加入适量缓冲液使终浓度达到0.1-1.0mg/mL(部分难溶蛋白可适当调整浓度);轻轻颠倒离心管或用移液器缓慢吹打混匀,避免剧烈震荡;置于冰上静置10-30分钟,期间可轻柔混匀2-3次,确保蛋白充分溶解。
2. 活性测定(以酶类蛋白为例)
试剂准备:根据酶的催化特性,配制相应的底物溶液、辅助因子溶液、反应缓冲液等;确保所有试剂均为分析纯以上级别,且在有效期内。
反应体系优化:通过预实验确定酶的最适反应温度、pH值、底物浓度、酶浓度等参数;通常反应体系体积为50-200μL,酶浓度需根据活性高低调整。
检测操作:按照优化后的反应体系依次加入试剂,启动反应后,通过分光光度法、荧光法、比色法等检测方法,实时或终点检测底物消耗、产物生成的信号变化。
活性计算:根据检测到的信号变化值,结合摩尔消光系数、荧光量子产率等参数,计算酶的活性单位(U);1U定义为在特定条件下,每分钟催化1μmol底物转化为产物的酶量。
3. Western Blot检测
样品处理:取适量复溶后的蛋白溶液,加入等体积的2×SDS上样缓冲液,沸水浴加热5-10分钟使蛋白变性;若蛋白含二硫键,可添加β-巯基乙醇或DTT辅助变性。
电泳分离:将变性后的样品加入SDS-PAGE凝胶的上样孔,同时加入蛋白Marker;先以80V电压运行浓缩胶(约30分钟),待样品进入分离胶后,调整电压至120V继续电泳(约60-90分钟),直至蛋白Marker分离清晰。
转膜操作:根据蛋白分子量选择合适孔径的PVDF或NC膜;采用湿转或半干转法将凝胶中的蛋白转移至膜上,湿转条件通常为200-300mA电流,转膜时间60-120分钟;转膜后可通过丽春红染色确认转膜效果。
封闭与孵育:用5%脱脂牛奶或BSA溶液封闭膜1-2小时,封闭非特异性结合位点;加入一抗(按说明书推荐比例稀释),4℃孵育过夜;次日用TBST缓冲液洗膜3次,每次10分钟;加入HRP标记的二抗(按说明书推荐比例稀释),室温孵育1小时;再次用TBST缓冲液洗膜3次,每次10分钟。
显色检测:将膜浸入ECL化学发光试剂中,避光孵育1-5分钟;使用化学发光成像系统曝光检测蛋白条带,根据条带位置和灰度分析蛋白表达情况。
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关键字: 人磷脂酸磷酸酶2C;PPAP2C;重组蛋白;
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