本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理,酶标板微孔预先包被抗大鼠iFABP特异性捕获抗体,加入梯度标准品与待测样本后,样本中的iFABP抗原被固相抗体特异性捕获,洗涤干净后加入酶标记的iFABP检测抗体,形成稳定的夹心免疫结构,经底物显色、终止反应后,检测吸光度,依据标准曲线精准定量大鼠样本中iFABP的浓度。
基本参数:

产品名称:大鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒
英文名称:iFABP ELISA Kit
货号:Y-E1434
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测浓度0.05ng/mL,高灵敏度适配肠道损伤微量标志物检测。
检测范围:0.1ng/mL - 5ng/mL,专门适配大鼠血清、肠组织匀浆、肠灌洗液样本。
反应时间:总时长80分钟,样本孵育25min、酶孵育30min、显色20min、终止读数5min。
保存条件:所有试剂2 - 8℃避光保存,标准品干粉密封冷藏,溶解后短期保存需低温避光。
有效期:未开封有效期6个月,溶解后的标准品仅限当日使用。
显色系统:快速显色TMB系统,显色均匀,反应速率稳定。
检测波长:450nm单一检测波长,检测精度高、误差小。
标准曲线绘制:五梯度标准品稀释,四参数拟合,R²≥0.996,拟合精度极高。
特异性:特异性识别大鼠iFABP,不与肝型、心肌型脂肪酸结合蛋白发生交叉反应。
重复性:板内CV≤3%,板间CV≤5%,重复性优异,适合批量样本检测。
注意事项:样本严禁反复冻融,反复冻融会破坏iFABP蛋白结构;洗板需彻底,避免非特异性结合导致背景升高;显色终止后需15分钟内完成读数。
储存与有效期:

未开封整套试剂盒:2~8℃避光冷藏,禁止冷冻;有效期 12 个月。
开封后保存
剩余酶标板条:自封袋密封,内置干燥剂 2~8℃避光;1 个月内用完。
HRP 酶结合物、TMB 底物:避光 2~8℃,避免光照失效。
浓缩洗涤液:2~30℃常温保存,结晶温水溶解不影响效果。
复溶后标准品:分装 - 20℃冻存,避免反复冻融,1 个月内使用。
过期试剂禁止使用。
实验步骤如下:

iFABP 标准品复溶配制梯度,试剂盒室温平衡 32min,标记酶标板孔类型;
每微孔加入 50μL 梯度标准品或大鼠肠组织上清,空白孔添加稀释缓冲液;
快速加入 100μL 辣根酶标记抗 iFABP 抗体,密封酶标板;
37℃避光孵育 69min,一步同步结合样本抗原与标记抗体;
洗板液浸泡微孔 35s,拍干残留液体,连续洗涤 6 次;
避光添加显色底物混合液 100μL,37℃避光反应 13min;
终止液混匀微孔液体,450nm 读数,对照曲线换算 iFABP 浓度。
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