双抗体夹心免疫酶联法,固相载体固定抗 CD3 捕获抗体,样本 T 细胞表面标志物 CD3 结合固相抗体,酶标二抗识别抗原,洗板显色后 OD 值与样本 CD3 含量成正比,标准曲线定量。
产品参数:
产品名称 | 大鼠CD3分子(CD3)ELISA试剂盒 | 货号 | Y-E1014 |
英文名称 | CD3 ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
灵敏度:最低检测灵敏度0.08ng/mL,可精准捕捉大鼠CD3微量表达差异
检测范围:0.15ng/mL - 90ng/mL,适配免疫相关大鼠样本的常规检测需求
反应时间:总实验时长120分钟,样本孵育60分钟,酶标抗体孵育30分钟,显色15分钟,终止平衡5分钟
保存条件:试剂盒主体试剂2 - 8℃冷藏,避光防潮;微孔板条密封保存,防止孔内抗体失活
有效期:未开封有效期6个月,规范储存条件下活性稳定,无降解失效
显色系统:稳定型TMB显色系统,显色反应温和,无快速氧化褪色问题
检测波长:标准检测波长450nm,参考波长630nm
标准曲线绘制:6点梯度标准品,四参数曲线拟合,R²≥0.995,数据拟合精准可靠
特异性:特异性识别大鼠CD3分子,与CD4、CD8等其他淋巴细胞表面分子无交叉反应
重复性:板内变异系数≤6%,板间变异系数≤8%,重复性符合科研实验标准
注意事项:样本避免溶血、脂血,溶血样本会破坏抗原结构影响检测结果;孵育过程保持湿盒环境,防止孔内液体蒸发;上机检测前去除孔内气泡
通用注意事项:
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
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实验操作流程:
试剂平衡:全套试剂室温平衡 23min,20 倍浓缩洗涤液稀释,外周血上清回暖。
标准品稀释:CD3 冻干标准品复溶梯度稀释 6 浓度,空白孔对照。
加样孵育:50μL 标准品 / 样本 + 50μL HRP 酶抗体,封膜 37℃避光孵育 59min。
洗板操作:洗涤液浸泡 30s,拍干残液,洗板 5 次。
底物显色:底物 A、B 各 50μL,避光孵育 14min。
终止读数:终止液混匀,8min 内检测 OD450。
数据计算:定量 T 淋巴细胞表面 CD3 分子表达量。
关键字: 大鼠CD3分子;CD3;ELISA试剂盒;
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