大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验原理，微孔板预先包被大鼠TRH固相抗原，加入待测样本和酶标抗体工作液后，样本中的游离TRH抗原与固相抗原竞争结合酶标抗体，TRH浓度越高，固相结合的酶标抗体越少，显色反应越弱，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线定量测定大鼠样本中TRH的含量。
基本参数‌：

产品名称：大鼠促甲状腺素释放激素(TRH)ELISA试剂盒

英文名称：TRH ELISA Kit
货号：Y-E1427

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测值0.05ng/mL，精准检测大鼠下丘脑微量TRH分泌水平。

检测范围：0.1ng/mL - 8ng/mL，适配大鼠下丘脑组织、血清样本检测。

反应时间：总时长110分钟，样本孵育40min、酶抗体孵育35min、显色30min、终止读数5min。

保存条件：2 - 8℃密封避光冷藏，标准品干粉低温保存，溶解后现配现用。

有效期：未开封有效期6个月，开封后1个月内用完。

显色系统：神经激素专用TMB显色体系，显色稳定无衰减。

检测波长：450nm主波长，620nm参比波长。

标准曲线绘制：六梯度标准品，四参数拟合，R²≥0.996。

特异性：特异性结合大鼠TRH，与其他下丘脑释放激素无交叉反应。

重复性：板内CV≤3%，板间CV≤5%，重复性优异。

注意事项：下丘脑组织样本需快速低温裂解，防止TRH降解；实验全程避光、恒温；移液精准，减少系统误差。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

TRH 标准品稀释配制浓度梯度，试剂盒室温平衡 32min，划分酶标板孔位；

各微孔添加 50μL 标准品或大鼠下丘脑组织上清，空白孔补稀释缓冲液；

全部微孔加入 100μL 酶标记抗 TRH 检测抗体，封板膜密封；

37℃避光孵育 68min，一步同步结合抗原与标记抗体；

洗涤液浸泡微孔 40s，彻底拍干，重复洗涤 6 次；

避光添加显色底物混合液 100μL，37℃避光显色 13min；

终止液混匀，450nm 读取吸光度，换算 TRH 浓度。
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