本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法原理，先将纯化的大鼠GnRH特异性抗体包被于酶标板微孔中，形成固相抗体，随后加入标准品、待测大鼠样本，样本中的GnRH会与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质后，加入辣根过氧化物酶标记的GnRH检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体的免疫复合物，再次洗涤除去游离酶标抗体，加入底物显色液进行显色反应，最后加入终止液终止反应，通过酶标仪测定各孔吸光度值，结合标准曲线即可精准计算出样本中大鼠GnRH的含量。
基本参数：
产品名称：大鼠促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒
英文名称：GnRH ELISA Kit
货号：Y-E1430
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测灵敏度≤1.0pg/mL
检测范围：2.5pg/mL - 80pg/mL
反应时间：总反应时长90分钟（温育60分钟、洗涤显色30分钟）
保存条件：2-8℃避光密封保存，禁止冷冻
有效期：未开封原装试剂盒12个月
显色系统：TMB双组分显色液，酶促底物显色体系
检测波长：450nm（主波长）、630nm（参比波长）
标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，采用四参数Logistic拟合绘制标准曲线
特异性：特异性识别大鼠GnRH，与小鼠、兔、人同源同源蛋白无交叉反应，无样本内杂蛋白干扰
重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%
注意事项：实验全程避免强光直射；标准品现配现用，稀释后不可留存；洗涤需充分，避免非特异性吸附导致结果偏差；样本溶血、脂血会干扰检测结果，需使用清澈血清/血浆样本。
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
提前取出试剂盒所有试剂、大鼠待测血清样本，室温平衡 30min，浓缩洗涤液按 1:20 纯水稀释备用。
包被板设置空白孔、标准品梯度孔、待测样本孔，空白孔加 100μL 样本稀释液，标准品孔依次加不同浓度 GnRH 标准品 100μL，样本孔加入 100μL 大鼠血清，轻晃板条混匀。
每孔立刻加入 100μL 酶标记 GnRH 结合抗体，封板膜密封酶标板，37℃恒温孵育 60min。
撕掉封板膜，倾倒孔内液体，每孔加满稀释洗涤液静置 30s 后甩干，重复洗涤 4 次，拍干残留液体。
所有孔同步加入显色底物 A、B 液各 50μL，避光环境 37℃显色 15min，观察标准品梯度蓝色区分度。
每孔快速滴加 50μL 终止液，轻拍板底混匀，蓝色液体转为黄色即终止反应。
酶标仪设置 450nm 主波长、630nm 参比波长，10min 内读取各孔 OD 值，绘制标准曲线计算样本 GnRH 浓度。
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