本试剂盒采用竞争法ELISA检测原理,微孔板固定大鼠CRH固相抗原,反应过程中待测样本中的游离CRH抗原与固相CRH抗原竞争结合酶标记特异性抗体,样本中CRH含量越高,固相显色信号强度越低,终止反应后检测吸光度,对照标准曲线的对应关系,精准定量大鼠样本中CRH的浓度。
基本参数:

产品名称:大鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA试剂盒
英文名称:CRH ELISA Kit
货号:Y-E1429
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测浓度0.04ng/mL,适配大鼠下丘脑应激相关微量CRH检测。
检测范围:0.1ng/mL - 7ng/mL,适用于大鼠下丘脑、血清、脑脊液样本。
反应时间:总时长105分钟,样本孵育40min、酶结合物孵育30min、显色30min、终止读数5min。
保存条件:2 - 8℃避光密封保存,神经内分泌试剂单独存放,防潮防污染。
有效期:未开封有效期6个月,溶解标准品当日使用。
显色系统:高稳定TMB显色体系,低浓度样本显色清晰。
检测波长:450nm主波长,630nm参比波长。
标准曲线绘制:五梯度标准品拟合,R²≥0.994。
特异性:特异性结合大鼠CRH,与GRH、TRH等释放激素无交叉反应。
重复性:板内CV≤3.2%,板间CV≤5.2%,重复性良好。
注意事项:应激模型样本需快速采集固定,防止CRH降解;孵育保持恒温恒湿;读数前震荡混匀,保证孔内液体均一。
储存与有效期:

未开封整套试剂盒:2~8℃避光冷藏,禁止冷冻;有效期 12 个月。
开封后保存
剩余酶标板条:自封袋密封,内置干燥剂 2~8℃避光;1 个月内用完。
HRP 酶结合物、TMB 底物:避光 2~8℃,避免光照失效。
浓缩洗涤液:2~30℃常温保存,结晶温水溶解不影响效果。
复溶后标准品:分装 - 20℃冻存,避免反复冻融,1 个月内使用。
过期试剂禁止使用。
实验步骤如下:

CRH 冻干标准品梯度稀释,试剂盒室温平衡 28min,标记酶标板所有微孔;
每微孔添加 50μL 标准品或大鼠脑组织匀浆上清,空白孔填充稀释缓冲液;
快速加入 100μL HRP 标记抗 CRH 特异性抗体,密封酶标板;
37℃避光孵育 62min,一步完成免疫结合;
洗板液浸泡微孔 35s,拍干,连续洗涤 6 次;
避光添加显色底物混合液 100μL,37℃避光反应 15min;
终止液混匀微孔液体,450nm 读数,拟合标准曲线换算 CRH 浓度。
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