大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒

采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将抗大鼠 NAG 特异性捕获抗体包被于固相微孔板，样本中所含 NAG 抗原结合板上固定抗体，洗去未结合杂蛋白后加入酶标记检测抗体形成固相抗体 - 抗原 - 酶标抗体夹心复合物，经底物显色反应生成有色产物，终止液终止显色后酶标仪测定吸光度值，对照标准品浓度梯度拟合标准曲线，定量计算样本内 NAG 含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤0.1U/L

检测范围：0.2U/L - 8U/L

反应时间：总反应时长120分钟（温育30分钟+洗板+显色30分钟+终止读数）

保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后试剂2-8℃密封保存

有效期：未开封原装试剂盒12个月

显色系统：TMB双组分显色液，过氧化物酶催化显色体系

检测波长：450nm（主波长），630nm（参比波长）

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，采用四参数Logistic拟合绘制标准曲线，计算样本含量

特异性：特异性识别大鼠NAG，与大鼠其他糖苷酶、同源结构蛋白无明显交叉反应

重复性：板内变异系数CV≤8%，板间变异系数CV≤10%

注意事项：实验全程避免样本溶血、脂血，溶血样本会干扰酶活性检测；显色时间需严格把控，避免强光直射；所有试剂使用前需平衡至室温，洗板需彻底，避免残留洗液影响OD值。
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

公司正在出售的产品：

实验操作流程：

试剂平衡：试剂盒全部组分室温放置 25min，20× 浓缩洗涤液用蒸馏水按 1:20 稀释混匀备用，酶标板拆取所需孔条，剩余板密封 2-8℃保存。

标准品配制：取冻干 NAG 标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，梯度稀释制备 7 个浓度标准梯度，设置空白对照孔、标准品复孔、样本复孔。

样本加样：标准品孔每孔加入 50μL 梯度标准液，待测样本孔加入 50μL 预处理血清 / 组织匀浆 / 细胞上清样本，空白孔加 50μL 样本稀释液。

酶结合物孵育：全部孔每孔加入 50μL HRP 标记 NAG 检测抗体，封板膜密封酶标板，37℃避光恒温孵育 65min，全程避免强光直射。

洗板操作：撕掉封板膜，快速甩干孔内液体，每孔加满稀释后洗涤液浸泡 35s，吸水纸彻底拍干残留液体，重复洗板 6 次。

底物显色：每孔依次加入 TMB 底物液 A、底物液 B 各 50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 20min，观察标准孔出现清晰蓝色梯度即可终止。

终止检测计算：每孔加入 50μL 终止液混匀，10min 内酶标仪 450nm 读取 OD 值；以标准品浓度为横轴、OD 值为纵轴拟合标准曲线，换算各组样本 NAG 含量。