大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒

双抗体夹心酶联免疫吸附检测，微孔板包被抗大鼠 α-Glu 捕获抗体，样本内源 α 葡萄糖苷酶结合固定抗体，洗涤后添加 HRP 标记抗 α-Glu 检测抗体形成夹心结构，底物显色读取 OD 值，依据标准曲线定量 α-Glu 蛋白浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度≤0.2U/L

检测范围：0.4U/L - 12U/L

反应时间：总反应时长120分钟（酶促温育40分钟+显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光冷藏，酶试剂单独存放，严禁冷冻结冰

有效期：未开封试剂盒12个月

显色系统：特异性酶底物TMB显色体系

检测波长：450nm

标准曲线绘制：酶活性标准梯度拟合四参数曲线，定量检测样本酶活性

特异性：特异性检测大鼠α葡萄糖苷酶，与β葡萄糖苷酶无交叉反应

重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%

注意事项：样本无溶血、无高温处理；反应pH值稳定，避免酸碱干扰酶活性；洗板轻柔，避免孔底损伤。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂平衡：全部试剂室温放置 25min，20 倍洗涤液稀释混匀备用。

标准品配制：a-Glu 冻干标准品充分溶解，梯度稀释制备 7 个浓度梯度。

加样：标准孔 50μL 梯度标准液，肾组织匀浆样本 50μL 上样。

酶抗体孵育：每孔 50μL HRP-a-Glu 抗体，密封 37℃避光孵育 65min。

洗板：洗涤液浸泡 35s，拍干，洗板 6 次。

显色：底物 A、B 各 50μL，避光 37℃显色 17min。

终止读数：终止液摇匀，9min 内 450nm 检测，计算 α 葡萄糖苷酶含量。