本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术，固相酶标板微孔包被纯化的大鼠HIF-1α特异性抗体，加入梯度标准品和待测大鼠组织、细胞样本，样本中的HIF-1α抗原与固相抗体特异性结合，洗板去除游离成分，加入辣根过氧化物酶标记的HIF-1α检测抗体，形成夹心免疫复合物，洗涤后进行底物显色反应，终止后测定吸光度，依据标准曲线精准定量样本中HIF-1α的表达水平。
基本参数：
产品名称：大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒
英文名称：HIF-1α ELISA Kit
货号：Y-E1275
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测灵敏度≤1.0pg/mL
检测范围：2.0pg/mL - 90pg/mL
反应时间：总反应时长110分钟（蛋白结合80分钟、显色30分钟）
保存条件：2-8℃避光保存，HIF抗体组分低温密封
有效期：未开封12个月，开盖后25天内使用
显色系统：高稳定TMB显色体系，适配转录因子检测
检测波长：450nm主波长检测
标准曲线绘制：四参数Logistic拟合曲线，R²≥0.992
特异性：特异性结合大鼠HIF-1α，与HIF-2α无交叉反应
重复性：板内CV≤8%，板间CV≤10%
注意事项：低氧因子极易降解，样本采集后快速低温冻存；全程避免常温放置过久。
关键注意事项：
实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书，不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存，未用完的试剂需密封后放回规定温度（通常2-8℃或-20℃）
避免试剂污染，不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖，防止出现假阳性结果
显色过程需避光，避免阳光直射影响结果
实验步骤如下：
试剂盒提前 36min 室温复温，浓缩洗涤液 1:28 稀释，大鼠缺氧组织匀浆冰浴防止蛋白降解。
酶标板每孔加入 100μL 梯度 HIF-1α 标准蛋白、组织上清、空白液。
一步混合酶结合液 200μL / 孔，密封 37℃避光孵育 78min。
洗涤液浸泡 48s，洗涤 5 次，垂直吸干微孔残留洗液。
单一显色液避光孵育 18min。
硫酸终止液终止显色，震荡混匀。
酶标仪 450nm 测吸光度，计算 HIF-1α 表达水平。
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