本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，用于大鼠Cyclin-D1的定量检测。酶标板微孔内包被大鼠Cyclin-D1特异性捕获抗体，样本中的Cyclin-D1抗原与固相抗体结合后，加入酶标记检测抗体形成稳定夹心免疫复合物。洗涤去除未结合组分后进行底物显色，显色深浅与样本中Cyclin-D1含量呈正相关，依据标准曲线可准确测定其含量。
基本参数：
产品名称：大鼠细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒
英文名称：Rat Cyclin-D1 ELISA Kit
货号：Y-E1351
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度≤1.8pg/mL
检测范围：3.5pg/mL - 140pg/mL
反应时间：全程140分钟，分步孵育80分钟、40分钟，显色20分钟
保存条件：2-8℃避光冷藏，抗体试剂单独存放
有效期：原装有效期8个月，开封后15天内用完
特异性：特异性识别大鼠Cyclin-D1，与D2、D3亚型交叉反应率＜3%
重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%
注意事项：细胞样本需充分裂解，保证蛋白释放；避免高温环境，周期蛋白易高温变性。
实验前准备工作：
1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释：
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。
待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：
微孔板室温回温 25min，梯度稀释 Cyclin-D1 标准品，细胞裂解样本稀释上样，空白孔仅稀释液，每孔 50μL。
每孔加入酶标记一抗复合物 50μL，密封酶标板，37℃孵育 69min。
洗板 5 轮，每轮加满洗涤液静置 30s，倒扣拍干。
显色 A、B 液各 50μL 混匀添加，避光显色 19min。
加入终止液 50μL 终止酶促显色。
酶标仪 450nm 检测吸光度值。
标准曲线定量计算样本 Cyclin-D1 浓度。
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