大鼠热休克蛋白27(HSP-27)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心酶联免疫吸附原理检测大鼠热休克蛋白27（HSP-27），固相酶标板预包被HSP-27特异性抗体。待测样本、标准品中的HSP-27抗原与固相捕获抗体特异性结合，孵育洗板去除游离杂质后，加入酶标记的配套检测抗体，构建抗体-抗原-酶标抗体夹心体系。底物在酶的催化下显色，显色强度与样本中HSP-27浓度正相关，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线可完成定量检测。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测灵敏度0.12ng/mL，高灵敏检测应激相关微量HSP-27蛋白。

检测范围：0.35ng/mL - 100ng/mL，覆盖大鼠氧化应激、细胞凋亡、损伤修复模型。

反应时间：全流程反应100分钟，孵育充分，结果精准。

保存条件：2 - 8℃避光冷藏，开封后孔板密封保存，避免污染。

有效期：未拆封有效期12个月，常规实验室保存稳定。

特异性：特异性结合大鼠HSP-27，与HSP家族其他亚型蛋白无交叉反应。

重复性：板内CV≤5.5%，板间CV≤7.5%，数据稳定性好。

注意事项：样本裂解后及时检测，避免蛋白降解；全程低温操作，防止蛋白变性；显色时间严格统一。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

1. 试剂盒组分室温回温 30min，配制洗涤液；组织裂解样本冰浴保存，离心取上清备用。

2. 酶标板分孔标记，标准品孔加入梯度 HSP-27 标准品 50μL，样本孔加入待测上清 50μL，空白孔无试剂添加。

3. 一步法加入酶偶联工作液 100μL 至检测孔，封板封口。

4. 37℃避光孵育 74min，恒温环境下稳定反应。

5. 倒掉孔内液体，洗涤液浸泡 36s，洗板 5 次，倒置拍干微孔残留洗液。

6. 加入显色 A、B 液各 50μL，混匀后 37℃避光显色 20min。

7. 终止液终止底物反应，酶标仪 450nm 读数，换算样本 HSP-27 含量。