大鼠神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA原理进行定量检测，预先将高特异性抗大鼠NGF抗体包被于酶标板。待测样本、标准品中的NGF抗原可与固相抗体特异性结合，经洗涤去除未结合杂质后，加入酶标记的NGF检测抗体，形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。通过底物显色、终止反应及吸光度检测，结合标准曲线的线性关系，精准测定大鼠样本中神经生长因子NGF的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测下限0.2ng/mL，可精准检测神经组织微量NGF。

检测范围：0.6ng/mL - 120ng/mL，适用于大鼠脑组织、脊髓、血清样本。

反应时间：全程90分钟，37℃样本温育35分钟、酶结合物温育30分钟、显色25分钟。

保存条件：2-8℃冷藏避光，抗体组分密封保存，防止吸湿失活。

有效期：未开封有效期12个月，开封后4周内完成检测使用。

特异性：专一识别大鼠NGF，与BDNF、NT-3等神经营养因子无交叉反应。

重复性：板内CV≤6.8%，板间CV≤8.8%，神经因子检测稳定性高。

注意事项：神经组织样本需冰上操作研磨，全程低温防止蛋白变性；避免样本反复冻融。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂盒室温静置 33min，稀释洗涤浓缩液，配制 NGF 系列标准品稀释液，酶标板分孔标记，待测大鼠脑组织匀浆样本提前离心取上清。

标准品孔加 NGF 梯度标准液 50μL，样本孔加待测上清 50μL，空白孔加样本稀释液 50μL，每孔加入酶标记抗体液 100μL，封板膜封闭。

37℃避光孵育 68min，充分发生夹心抗原抗体结合。

揭开封膜倒掉液体，洗涤液加满每孔浸泡 30s，重复洗板 6 次，吸水纸拍干板底水分。

每孔依次添加显色 A、B 液各 50μL，震荡混匀，37℃避光显色 19min。

逐孔加入终止液 50μL 终止显色，轻摇酶标板混匀体系。

450nm 酶标仪读取 OD 值，标准曲线法计算 NGF 浓度。