本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固相包被大鼠ADAMTS13/vWF-cp特异性捕获抗体，加入待测大鼠样本与标准品后，样本中的裂解蛋白酶抗原与固相抗体特异性结合，充分反应后洗涤纯化，加入酶标记的特异性检测抗体，构建免疫夹心复合物，通过底物显色、终止反应后测定吸光度，吸光度数值与样本中ADAMTS13含量成正比，对照标准曲线完成定量检测。
基本参数：
产品名称：大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA试剂盒
英文名称：ADAMTS-13/vWF-cp ELISA
货号：Y-E1073
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测灵敏度≤3pg/mL，精准检测大鼠ADAMTS13蛋白酶含量
检测范围：6pg/mL - 700pg/mL，适配大鼠血栓、凝血功能紊乱模型检测
反应时间：全流程实验耗时110分钟，酶抗原结合充分，数据稳定
保存条件：酶类试剂2-8℃避光冷藏，严格避免高温、冻融失活
有效期：原装未开封试剂盒有效期6个月
特异性：专一性靶向大鼠ADAMTS13，与其他金属蛋白酶无交叉反应
重复性：板内变异系数≤6%，板间变异系数≤8%
注意事项：实验全程使用无酶耗材，避免蛋白酶污染导致检测偏差。
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
全套试剂室温静置 32min，拆分微孔板，设置对照孔与样品检测孔并标记。
梯度稀释标准品构建标准曲线，标准孔加 50μL 标品，血清样本孔加入 50μL 待测大鼠血清，空白孔加稀释缓冲液。
每孔添加酶工作液 100μL，密封封膜，37℃孵育 71min。
洗板 5 轮，浸泡 34s 每轮，沥干微孔内所有液体。
显色 A、B 液各 50μL 依次加样，避光显色 15min。
50μL 终止液终止反应，轻震酶标板混匀体系。
450nm 波长检测吸光值，定量 ADAMTS13/vWF-cp 含量。
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