本试剂盒采用双抗体夹心ELISA技术原理，酶标板微孔内预包被大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)特异性抗体，待测样本中的PF-4抗原可被固相抗体特异性捕获，结合辣根过氧化物酶标记抗体形成夹心免疫复合物，经洗涤、底物显色、终止反应后，测定吸光度，依据标准曲线精准定量大鼠样本中PF-4的浓度。
基本参数：
产品名称：大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒
英文名称：PF-4 ELISA Kit
货号：Y-E1475
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度0.04ng/mL
检测范围：0.1ng/mL - 25ng/mL
反应时间：总反应时长100分钟
保存条件：2-8℃避光干燥保存，板条密封防潮
有效期：未开封6个月，开封板条尽快使用
特异性：精准识别大鼠PF-4/CXCL4，趋化因子家族无交叉反应
重复性：板内变异系数≤4.6%，板间变异系数≤6.6%
注意事项：洗涤步骤需彻底，去除未结合杂质，保证显色纯净
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
试剂盒室温静置 30min，稀释洗涤液，梯度稀释 PF-4 标准品，大鼠待测血清样本稀释处理。
酶标板分孔编号，空白孔加稀释缓冲液，标准孔加梯度标品，样本孔加待测液，所有孔加入一步法酶结合液，封板。
37℃避光孵育 62min，防止孔间液体交叉渗漏。
弃除孔内反应液，洗涤液浸泡每孔 32s，甩干，洗板 5 次，吸水纸拍干微孔。
加入显色底物 AB 液，轻微震荡混匀，37℃避光显色 16min。
滴加终止液终止显色反应，混匀板面液体。
450nm 波长读取 OD 值，计算样本 PF-4 浓度。
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