大鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔预包被大鼠胰蛋白酶(trypsin)特异性抗体，待测样本中的胰蛋白酶抗原可与固相抗体特异性结合，后续结合辣根过氧化物酶标记抗体形成完整免疫复合物，洗涤去除游离杂质后进行酶促显色，吸光度与胰蛋白酶含量正相关，通过标准曲线完成定量检测。
基本参数‌：

产品名称：大鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA试剂盒

英文名称：Rat trypsin ELISA Kit
货号：Y-E1631

规格：48T/96T

灵敏度：最低检测浓度0.08ng/mL

检测范围：0.25ng/mL - 42ng/mL

反应时间：总反应时长95分钟

保存条件：2-8℃避光保存，蛋白酶试剂低温密封

有效期：未开封6个月，开封试剂1个月内用完

特异性：特异性检测大鼠胰蛋白酶，与胰凝乳蛋白酶无交叉反应

重复性：板内变异系数≤5.4%，板间变异系数≤7.4%

注意事项：胰腺样本需快速灭活，避免蛋白酶自身降解，保证检测准确性
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。
实验步骤如下：

试剂盒室温回温 33min，稀释浓缩洗涤液，梯度制备胰蛋白酶标准品，待测肠液 / 血清样本低温预处理。

标记酶标板孔位，空白、标准、样本孔分别加注对应液体，每孔加入一步法酶偶联试剂，覆膜封板。

37℃避光孵育 68min，保证抗原充分结合包被抗体。

揭膜倒净废液，洗涤液浸泡微孔 35s，甩干，洗板 5 次，彻底拍干微孔内洗液。

依次加入显色 A 液、B 液，震荡混匀，37℃避光显色 18min。

加入终止液终止酶促反应，摇匀酶标板。

450nm 波长检测吸光度，标准曲线定量胰蛋白酶含量。
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