本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的大鼠IGFBP-4特异性抗体包被于酶标板微孔内，形成固相抗体，向微孔中加入标准品、待测大鼠样本，样本中的IGFBP-4抗原可与固相抗体特异性结合，充分洗涤去除未结合杂质后，加入酶标记的特异性二抗，形成固相抗体-抗原-酶标抗体的免疫复合物，再次洗涤后加入底物显色液进行显色反应，在一定浓度范围内，样本中IGFBP-4含量与显色深浅呈正相关，通过酶标仪测定对应吸光度值，即可结合标准曲线计算出样本中IGFBP-4的浓度。
基本参数：
产品名称：大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒
英文名称：IGFBP-4 ELISA Kit
货号：Y-E1543
规格：48T/96T
灵敏度：最低检测浓度0.15ng/mL
检测范围：0.3ng/mL - 10ng/mL
反应时间：全程120分钟（温育分两步，样本孵育60min，酶标孵育30min，显色30min）
保存条件：试剂盒未开封2-8℃冷藏保存，严禁冷冻；开封后板条密封2-8℃存放
有效期：未开封储存有效期6个月
特异性：特异性识别大鼠IGFBP-4，与大鼠IGFBP-1、IGFBP-3等同源蛋白无交叉反应，与小鼠、兔同源蛋白轻微交叉可忽略
重复性：板内变异系数CV≤6%，板间变异系数CV≤8%
注意事项：样本需新鲜分离，避免反复冻融；温育过程需避光、恒温，避免温度波动影响检测结果；洗涤需充分，防止非特异性结合干扰数值
试剂盒组成：
预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点
辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下：
取出试剂盒室温平衡 30min，配制洗涤液、标准品梯度稀释液、样本稀释液，标记酶标板孔位，设置空白孔、标准品孔、待测样本孔。
空白孔不加任何液体，标准品孔每孔加入对应浓度梯度标准品 50μL，待测样本孔先加样本稀释液 40μL，再加入 10μL 待测大鼠血清 / 组织上清样本，轻柔晃动酶标板混匀。
每孔直接加入一步法酶结合物工作液 100μL，封板膜密封酶标板，37℃恒温孵育 60min。
揭去封板膜，弃去孔内全部液体，每孔加满洗涤液静置 30s 后甩干，重复洗板 5 次，最后一次拍净孔内残留液体。
每孔依次加入显色液 A、显色液 B 各 50μL，避光环境下 37℃避光显色 15min。
每孔快速加入终止液 50μL 终止显色反应，轻晃酶标板混匀。
15min 内使用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔 OD 值，依据标准品浓度与对应 OD 值绘制标准曲线，计算样本中 IGFBP-4 含量。
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