本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理,酶标板微孔预先包被大鼠ADH特异性捕获抗体,加入标准品及大鼠待测生物样本后,样本中的乙醇脱氢酶抗原与固相抗体特异性免疫结合,洗板去除游离成分,加入酶标记ADH检测抗体孵育结合,形成固相抗体-ADH抗原-酶标抗体复合物,经底物显色、终止液终止反应后,吸光度数值与样本中ADH浓度成正比,通过标准曲线拟合即可定量检测大鼠样本中乙醇脱氢酶的含量。
基本参数:

产品名称:大鼠乙醇脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒
英文名称:ADH ELISA Kit
货号:Y-E1084
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测浓度0.2U/L
检测范围:0.5U/L - 60U/L
反应时间:全程100分钟(样本孵育40min,酶标孵育30min,显色30min)
保存条件:试剂盒2-8℃冷藏,显色液、终止液室温密封保存
有效期:未开封储存有效期12个月
特异性:特异性结合大鼠乙醇脱氢酶,与乙醛脱氢酶、其他氧化还原酶无交叉反应
重复性:板内变异系数CV≤6%,板间变异系数CV≤8%
注意事项:组织样本需充分匀浆、离心取上清;避免酒精污染实验环境,干扰酶活性检测;试剂混匀轻柔,避免起泡
试剂盒组成:

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原,结合目标物
标准品 6支/套 制备标准曲线,定量检测依据
生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物,提供酶结合位点
辣根过氧化物酶(HRP)标记亲和素 1瓶 与生物素结合,催化底物显色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物,产生颜色变化
终止液 1瓶 终止酶促反应,稳定显色结果
浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板,去除未结合物质
封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发
实验步骤如下:

试剂盒常温平衡 30min,稀释浓缩洗涤液,配制 ADH 梯度标准液,酶标板分孔标记实验组别。
标准孔加入不同浓度 ADH 标准品 50μL,待测孔加入 50μL 大鼠组织匀浆上清样本,空白孔不加液。
全部检测孔添加一步法酶偶联物工作液 100μL,覆膜封板,37℃孵育 60min。
揭膜弃液,洗涤液加满微孔静置 40s 后甩干,循环洗板 5 次,彻底去除游离反应物。
每孔加入显色底物 A、B 各 50μL,避光 37℃显色 15min。
每孔滴加终止液 50μL 终止显色,水平晃动混匀。
酶标仪 450nm 读取 OD 值,拟合标准曲线,定量样本乙醇脱氢酶 ADH 水平。
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