本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附原理,将纯化的幽门螺旋菌特异性抗原包被于酶标板微孔,封闭非特异性位点后加入大鼠待测血清样本,样本中的Hp-IgG抗体可与固相抗原特异性结合,洗涤去除未结合杂质,加入酶标记抗大鼠IgG二抗孵育结合,再次洗涤后加入底物显色,显色强度与样本中幽门螺旋菌IgG抗体含量呈正相关,通过吸光度检测及标准曲线比对完成定量检测。
基本参数:

产品名称:大鼠幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒
英文名称:Hp-IgG ELISA Kit
货号:Y-E1152
规格:48T/96T
灵敏度:最低检测滴度1:10
检测范围:1:10 - 1:640
反应时间:全程190分钟(样本孵育130min,酶标孵育30min,显色30min)
保存条件:2-8℃密封保存,酶结合液避光存放
有效期:未开封储存有效期12个月
特异性:特异性识别大鼠幽门螺旋菌特异性IgG,与其他肠道菌抗体无交叉反应
重复性:板内变异系数CV≤7%,板间变异系数CV≤10%
注意事项:血清样本无污染、无溶血;孵育全程保湿避光;显色终止后10分钟内完成读数
实验前准备工作:

1. 试剂平衡与稀释
试剂盒所有组分(酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液)从 2~8℃取出,室温(20~25℃)放置平衡 30min,严禁直接低温操作。
浓缩洗涤液配制:按标签标注比例用去离子纯水稀释(常见 20× 浓缩液:1 份浓缩液 + 19 份纯水),混匀备用,现配现用。
标准品复溶 / 梯度稀释:
冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解,室温静置 10min,轻柔吹打混匀;
按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品,单独标记,剩余原液分装 - 20℃避光保存,避免反复冻融。
待测样本预处理:血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释,浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清;溶血、脂血严重样本弃用。
2. 耗材与设备准备
设备:恒温 37℃孵育箱、酶标仪(450nm 主波长,630nm 参比)、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机(或手动洗板槽)、封板膜、离心管。
耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染,移液枪提前校准。
取出本次实验所需酶标板条,剩余未使用板条装入铝箔密封袋,加干燥剂 2~8℃避光保存。
3. 孔位规划标记
酶标板做好分区标记:空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔(所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差)。
实验步骤如下:

试剂盒常温静置 30min,配比洗涤缓冲液,梯度稀释 Hp-IgG 标准品,酶标板标记孔位组别。
标准品孔加入梯度幽门螺旋菌 IgG 标准品 50μL,样本孔加入 50μL 大鼠血清待测液,空白孔空置不加液。
非空白孔加入一步法酶标记二抗工作液 100μL,封板密封,37℃孵育 55min。
揭膜倾倒废液,洗涤液加满微孔浸泡 35s 后甩干,连续洗板 5 次,吸干残留液体。
每孔加入显色液 A、B 各 50μL,避光 37℃显色 16min。
逐孔添加终止液 50μL 终止反应,轻摇酶标板混匀。
450nm 波长读取吸光值,依据标准曲线计算 Hp-IgG 抗体含量。
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