大鼠钩端螺旋体IgG(Lep IgG)ELISA试剂盒

本试剂盒采用间接ELISA检测原理，酶标板微孔包被钩端螺旋体特异性抗原，待测大鼠样本中的Lep IgG抗体可与固相抗原特异性结合，洗板后加入酶标记抗大鼠IgG二抗，催化底物显色，样本中Lep IgG抗体含量越高，显色吸光度值越高，通过标准曲线可定量检测大鼠体内钩端螺旋体IgG抗体水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测滴度1:10

检测范围：1:10 - 1:1280样本稀释度

反应时间：总反应时长180分钟（样本结合90分钟、二抗温育60分钟、显色30分钟）

保存条件：2-8℃避光保存，酶结合物严禁冷冻，洗涤液室温保存

有效期：未开封有效期12个月，开封后2个月内使用

显色系统：TMB底物显色，酸性终止液终止显色

检测波长：450nm

标准曲线绘制：采用阳性对照梯度稀释拟合曲线，判定样本抗体阳性/阴性及滴度

特异性：特异性结合大鼠钩端螺旋体IgG抗体，与其他病原体抗体无交叉反应

重复性：板内CV≤7%，板间CV≤9%

注意事项：样本需无菌分离血清，无细菌污染；温育过程保持湿度饱和，避免孔板干燥；结果判定统一时间读数
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

试剂盒室温平衡 35min，梯度稀释钩端螺旋体 IgG 阳性标准品，设置阴性对照孔、标准孔、大鼠血清检测孔。

直接加样入孔：标准品孔加梯度标准液 100μL，待测孔加大鼠血清稀释样本 100μL，空白孔加稀释液。

封板膜密封，37℃温育 90min，使样本内 Lep IgG 与固相抗原结合。

倾倒废液，洗涤液加满每孔静置 38s，洗板重复 6 次，彻底洗脱非特异性结合物质。

除空白孔外加入羊抗大鼠 IgG 酶标二抗 100μL，避光封板 37℃孵育 40min。

每孔加入 TMB 显色液 100μL，避光轻摇，37℃显色 20min。

加入终止液终止反应，450nm 测 OD 值，对照标准曲线判定样本钩端螺旋体 IgG 滴度。