大鼠褪黑素(MT/MLT)ELISA试剂盒

本试剂盒采用竞争抑制ELISA法检测大鼠样本中褪黑素含量。本试剂盒将褪黑素抗原包被于酶标板，样本中的MT与固相抗原竞争结合有限的酶标记抗MT抗体，样本中MT浓度越高，酶标板上结合的酶活性越低，底物显色越弱，通过测定各孔吸光度值，结合竞争标准曲线，可精准计算大鼠血清、脑组织等样本中褪黑素的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测限0.05ng/mL，超高灵敏度检测大鼠血清、松果体组织中褪黑素。

检测范围：0.1ng/mL - 4ng/mL，适配大鼠睡眠调节、内分泌紊乱模型检测。

反应时间：全程85分钟，快速孵育60分钟，显色25分钟。

保存条件：激素试剂2-8℃严格避光冷藏，褪黑素易光解，禁止光照。

有效期：原装有效期9个月，开封后密封避光保存20天内有效。

特异性：专一识别大鼠褪黑素，与血清素、其他松果体激素无交叉反应。

重复性：板内CV≤4.2%，板间CV≤5.5%，内分泌微量指标检测精度极高。

注意事项：全程避光操作，样本采集后快速避光保存，避免褪黑素光降解。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温回温 33min，稀释浓缩洗涤液，梯度稀释褪黑素标准品，拆分酶标板条，未使用板条密封 2~8℃保存。

酶标板分区标记组别，标准品孔加入梯度标准品 50μL，待测样本孔加入血清待测液 50μL，空白孔不加任何液体。

非空白孔加入酶标记二抗工作液 100μL，封板膜封口，37℃避光孵育 74min。

撕掉封板，倾倒废液，洗涤液加满每孔浸泡 40s，吸水纸拍干，连续洗板 6 次。

每孔分别加入显色 A 液、B 液 50μL，低速震荡混匀，37℃避光显色 20min。

每孔添加终止液 50μL，充分混匀终止酶促反应。

酶标仪 450nm 波长检测 OD 值，计算样本褪黑素 MT 浓度。