全能核酸酶需要1–10 mM Mg²⁺才有催化活性。它无序列偏好,随机切断磷酸二酯键,可以将所有形式的DNA和RNA最终降解成2-5bp的5’-单磷酸寡核苷酸(无大分子核酸残留),底物光谱性强,且没有蛋白酶活性。
DNA:单链 / 双链、线性、环状、超螺旋质粒、基因组 DNA;
RNA:mRNA、tRNA、rRNA、病毒 RNA、杂合链 RNA-DNA;
传统 DNase 只切 DNA、RNase 只切 RNA,全能核酸酶一酶清除两类核酸污染。
6 M 尿素、0.1 M 盐酸胍(包涵体变性体系)
0.1% SDS、0.4% Triton X-100、脱氧胆酸钠
1 mM PMSF 蛋白酶抑制剂、低浓度 EDTA
pH 耐受:6.0–10.0,最适 pH 8.0;温度 0–45℃均工作,37℃活性峰值。
不会降解重组蛋白、抗体、病毒衣壳;
仅剥离缠绕在蛋白、包涵体、AAV / 慢病毒表面的核酸链。
二、实验室使用场景
1)蛋白提取降粘
细胞裂解后基因组核酸释放导致样品黏稠、难过滤 / 离心;全能核酸酶快速降解核酸,降低黏度,提升层析纯化回收率,改善 SDS-PAGE、2D 电泳条带分辨率,消除核酸造成的拖尾背景。
2)包涵体制备与复性
高浓度尿素 / 盐酸胍变性液中仍有效,去除包裹包涵体的核酸,提升复性蛋白纯度。
3)细胞样本防结团
PBMC、干细胞冻存 / 解离缓冲液添加,降解细胞释放的游离 DNA,消除细胞交联成团现象,保证流式、细胞分选效果。
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