人纤维母细胞表面抗原(FSP)ELISA试剂盒

本试剂盒依托固相双抗体夹心酶免疫分析原理，将高特异性抗人FSP抗体固定于微孔板，加入梯度标准品和待测生物样本，样本内的FSP抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，洗涤去除未结合成分后，加入辣根过氧化物酶标记的FSP检测抗体，形成完整夹心免疫复合物，经底物显色、终止反应后测定吸光度，结合标准曲线线性关系，定量检测样本中FSP的含量。
产品参数：

‌灵敏度：0.16ng/mL

检测范围：0.32-20.5ng/mL

反应时间：样本孵育 82min，二抗 52min，避光显色 15min

保存条件：试剂盒 2-8℃，拆封后板条放入自封袋加干燥剂冷藏

显色系统：常规 TMB 显色体系，终止后颜色稳定 25min

检测波长：450nm，参比 630nm

标准曲线绘制：采用 Logistic 四参数法绘制标准曲线

注意事项：成纤维细胞裂解样本需充分离心去除细胞碎片，碎片会吸附抗体造成假阳性
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒常温静置 28min 回温，稀释一步法酶标记一抗液，规划微孔板孔位。

各孔预加酶液 50μL，标准品孔加入梯度 FSP 标准品 50μL，样品孔加待测样本 50μL，空白孔加稀释液。

封板 37℃孵育 65min，弃净液体，洗板 5 次，每次浸泡 30s，拍干孔内洗液。

依次添加显色 A、B 液各 50μL，震荡混匀。

避光 37℃显色 14min。

加入终止液 50μL 终止反应。

450nm 测 OD 值，计算样本 FSP 浓度。