人血红蛋白C(HbC)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，将抗人HbC单克隆抗体固定于酶标板微孔内壁作为固相载体，依次加入梯度标准品和待测人体样本，样本内的HbC抗原可与固相抗体发生特异性免疫结合，洗涤除去未结合的杂质蛋白与游离成分，随后加入辣根过氧化物酶标记的HbC检测抗体，孵育后形成稳定的夹心式免疫复合物，彻底洗涤未结合酶标抗体后，加入显色底物进行酶促显色反应，终止反应后读取各孔吸光度，结合标准曲线的浓度与吸光度对应关系，定量检测样本中人HbC的含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.12μg/mL

检测范围：0.5~32μg/mL

反应时间：一抗结合 50min，酶结合物孵育 40min，显色 20min，全程 110min

保存条件：整盒试剂盒 2~8℃冷藏，显色液需避光单独存放，严禁冷冻

显色系统：双组份 A+B TMB 显色体系，2M H₂SO₄终止

检测波长：单波长 450nm 直接读数

标准曲线绘制：标准品梯度稀释 7 个浓度点，线性回归拟合标准曲线

注意事项：全血样本需离心分离上清，红细胞破裂过度会造成结果假性偏高
储存与有效期：

未开封整套试剂盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷冻；有效期 12 个月。

开封后保存

剩余酶标板条：自封袋密封，内置干燥剂 2～8℃避光；1 个月内用完。

HRP 酶结合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。

浓缩洗涤液：2～30℃常温保存，结晶温水溶解不影响效果。

复溶后标准品：分装 - 20℃冻存，避免反复冻融，1 个月内使用。

过期试剂禁止使用。

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实验操作流程：

样本前处理：新鲜抗凝全血样本离心分离红细胞沉淀，裂解红细胞制备血红蛋白提取液，用样本稀释液定容稀释，混匀后室温放置 10min；试剂全部室温复温 25min。

板孔加样孵育：划分空白、标准、样本孔，每孔加入标准品 / 待测样本液，随即加入酶标记抗体工作液，封板封口，37℃温浴 55min 完成抗原抗体一步结合。

反复洗板：倾倒孔内废液，洗涤液注满每孔，浸泡 40s 后弃液，连续洗板 4 次，拍净孔底多余洗液，杜绝交叉污染。

避光显色：每孔添加显色底物 A、B 混合液，低速震荡混匀，37℃避光静置显色 12min，全程避免强光直射。

终止液关停反应：准时向所有反应孔滴加终止液，终止底物催化显色，轻微振荡酶标板使液体混合均匀。

酶标仪读数：调整酶标仪主波长 450nm，参比波长 630nm，依次测定每孔 OD 值，做好编号对应记录。

数据拟合核算：用标准品系列浓度拟合线性标准曲线，计算稀释后样本浓度，还原稀释倍率得到样本 HbC 实际浓度，整理实验台账。