人血红蛋白H(HbH)ELISA试剂盒

本试剂盒运用经典双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，酶标板微孔预先包被有人HbH特异性捕获抗体，实验过程中加入的标准品与待测样本中的HbH抗原会特异性结合至固相抗体上，经过充分洗涤去除非特异性结合物质，再加入对应的酶标记检测抗体，构建固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物，经二次洗涤净化体系后，加入TMB显色底物进行显色，通过终止液终止显色反应，利用酶标仪检测吸光度，根据标准曲线回归方程即可定量测定样本中HbH的浓度水平。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测值 0.09μg/mL

检测范围：0.25~16μg/mL

反应时间：板内样本温育 70min，二抗 50min，底物显色 12min，总时长 132min

保存条件：试剂盒主体 2~8℃，标准品干粉 - 20℃冻存，复溶后一次性用完

显色系统：HRP 催化 TMB 显色，盐酸终止液终止变色

检测波长：450nm 为主，570nm 做背景校正

标准曲线绘制：8 个梯度标准品，采用二次多项式拟合标准曲线方程

注意事项：检测前微孔板需室温平衡 20min，否则孔间 OD 差异偏大
试剂盒组成：

预包被抗体/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕获抗体/抗原，结合目标物

标准品 6支/套 制备标准曲线，定量检测依据

生物素标记抗体/抗原 1瓶 识别并结合目标物，提供酶结合位点

辣根过氧化物酶（HRP）标记亲和素 1瓶 与生物素结合，催化底物显色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作为酶促反应底物，产生颜色变化

终止液 1瓶 终止酶促反应，稳定显色结果

浓缩洗涤液 1瓶 清洗微孔板，去除未结合物质

封板膜 2张 孵育过程中防止污染和挥发

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实验操作流程：

样本制备：全血样本低温离心取红细胞，专用裂解液破碎红细胞释放血红蛋白，稀释液梯度稀释待测样品，涡旋震荡 15s 混匀；试剂盒试剂室温平衡 30min。

一步法加样封板：各孔分别添加标准品、待测样本与酶标记检测液，覆膜密封酶标板，置于 37℃孵育箱反应 70min。

洗板除杂：弃净孔中反应液，洗涤缓冲液加满微孔，浸泡 35s 后倒掉，重复洗板 5 次，最后一次强力拍干微孔内液体。

底物显色操作：每孔分别加入显色 A 液与 B 液，水平晃动酶标板 8s 混匀，避光 37℃孵育显色 18min。

终止显色反应：每孔加入终止液，溶液由蓝色转为黄色即反应终止，轻摇酶标板保证每孔混匀。

光度值测定：酶标仪设置检测波长 450nm，逐孔检测吸光值，按孔位顺序登记数据。

曲线定量分析：根据标准品 OD 值建立标准曲线方程，带入样本 OD 值计算稀释后浓度，折算稀释倍数得出 HbH 原始含量，归档实验结果。