本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理,酶标板微孔预先包被抗人中性粒细胞碱性磷酸酶特异性捕获抗体,加入标准品及待测样本后,样本中的NAP与固相抗体特异性结合,洗涤去除游离杂质,加入HRP标记的NAP检测抗体形成免疫夹心复合物,底物显色后终止反应,吸光度值与NAP含量成正比,通过标准曲线可定量检测样本中目标酶的浓度。
基本参数:

产品名称:人中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)ELISA试剂盒
英文名称:NAP Elisa Kit
货号:Y-E3056
规格:48T/96T
灵敏度:检出下限 0.2U/L
检测范围:0.4U/L - 25.6U/L
反应时间:抗原结合 46min,酶二抗 46min,显色 13min
保存条件:试剂盒 2-8℃避光,底物液不可室温久放
显色系统:TMB 显色体系
检测波长:450nm 校正 630nm
标准曲线绘制:四参数拟合标准曲线,适配酶活性定量检测
注意事项:抗凝血液样本优先选用 EDTA 抗凝,肝素会抑制酶活性造成结果偏差
关键注意事项:

实验前需仔细阅读对应试剂盒的说明书,不同试剂盒的孵育时间、加样量可能存在差异
所有试剂需按要求储存,未用完的试剂需密封后放回规定温度(通常2-8℃或-20℃)
避免试剂污染,不同组分的移液器枪头需分开使用
洗板时需确保每孔都被洗涤液覆盖,防止出现假阳性结果
显色过程需避光,避免阳光直射影响结果
实验步骤如下:

试剂盒室温回温 30min,梯度稀释 NAP 标准品,白细胞裂解液稀释制备待测样本,对酶标板分组标记。
空白孔加稀释缓冲液,标准品孔依次添加梯度 NAP 标准液,样本孔加入待测裂解样本。
直接向全部微孔加入酶标记抗体工作液,省略分步孵育洗板,轻板混匀液体。
封板膜密封酶标板,37℃恒温避光孵育 66min,单层放置孵育。
倒掉孔内反应废液,洗板液洗板 5 次,每次浸泡 32s,拍干微孔残留洗液。
避光滴加显色底物,37℃避光显色 15min,观察梯度显色效果。
终止液终止反应,酶标仪 450nm 测 OD 值,换算 NAP 酶蛋白浓度。
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