大鼠中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA原理进行定量检测，酶标板微孔预先包被大鼠NAP-2/CXCL7特异性捕获抗体。检测过程中，待测样本、标准品中的目标趋化蛋白与固相抗体特异性结合，洗板去除未结合组分后，加入酶标记的NAP-2/CXCL7检测抗体，形成稳定的免疫复合物。经TMB底物显色、酸性终止液终止反应后，微孔溶液吸光度值与样本中NAP-2/CXCL7含量呈正比，通过标准曲线拟合计算，可精准检测大鼠样本中该趋化蛋白的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤1.0pg/mL

检测范围：2pg/mL - 100pg/mL

反应时间：总反应120分钟（37℃恒温孵育60min、酶反应30min、显色30min）

保存条件：2-8℃冷藏避光，试剂开封后1个月内使用完毕

有效期：12个月

检测波长：450nm/630nm双波长校正

标准曲线绘制：梯度稀释标准品检测，四参数拟合曲线，R²≥0.990

注意事项：细胞上清样本需去除细胞碎片，避免杂质影响抗原抗体结合
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂盒组分室温平衡 32min，稀释浓缩洗涤液，待测样本分装避免反复冻融，裁剪所需酶标条。

2. 标准品孔加入梯度 NAP-2 标准品 50μL，样本孔上样 50μL 待测液，空白孔补稀释液。

3. 每孔加入酶偶联抗体液 100μL，封板密封，混匀后 37℃孵育 58min。

4. 弃净液体，洗涤液洗板 6 次，单次浸泡 30s，拍干孔内残留液体。

5. 避光加入显色底物 A、B 各 50μL，37℃避光显色 19min。

6. 加入终止液 50μL 混匀终止反应。

7. 450nm 读取 OD 值，绘制标准曲线测定 CXCL7 含量。