人血清/糖皮质激素调节激酶2(GSK2)ELISA试剂盒

本试剂盒依托双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理开展检测，微孔板预先固定抗人GSK2特异性抗体，加入梯度标准品与待测血清样本，样本中的GSK2蛋白抗原与固相抗体特异性结合，经洗涤去除非特异性结合物质后，加入酶标记GSK2检测抗体，形成稳定的固相免疫复合物，洗涤净化体系后加入显色底物进行酶促显色，终止反应后检测吸光度，结合标准曲线即可定量测定待测样本中GSK2的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.05ng/L

检测范围：0.156~10ng/L

反应时间：37℃孵育样本 65min，二抗 40min，避光显色 16min

保存条件：试剂盒 2~8℃，标准品冻存于 - 20℃，反复冻融不超过 2 次

显色系统：A、B 液混合式 TMB 显色

检测波长：450nm 单一波长检测

标准曲线绘制：五点标准品，线性回归计算曲线公式

注意事项：洗板步骤必须充分，残留洗液会大幅拉高空白孔数值
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

血清样本稀释：无脂血无溶血血清样本用稀释液配比稀释，涡旋混匀，室温静置 10min；试剂盒全部试剂室温平衡 30min。

一步加样孵育：各孔加入标准品、待测血清与酶标记液，密封酶标板，37℃恒温孵育 62min。

洗板除游离杂质：弃液后洗涤液浸泡微孔 35s，重复洗板 5 次，吸水纸拍干微孔。

避光显色：添加显色液 A、B，混匀后避光 37℃显色 13min。

终止液终止反应：准时加终止液，混匀微孔内反应体系。

仪器检测 OD 值：450nm 波长检测吸光度，逐孔记录数据。

定量计算：标准曲线法计算稀释后 GSK2 浓度，折算稀释倍数获得原始样本浓度，归档数据。