人血清白蛋白(HSA)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测人血清白蛋白含量，酶标板微孔预先包被高特异性抗人HSA抗体，加入标准品及待测血清样本后，样本中的HSA抗原与固相抗体发生特异性免疫结合，洗涤去除未结合的杂蛋白和游离组分，加入辣根过氧化物酶标记的HSA检测抗体，孵育形成夹心式免疫复合物，充分洗涤后加入显色底物显色，终止反应后测定吸光度，根据标准曲线的浓度梯度关系，精准定量样本中HSA的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最小检出 0.3mg/L

检测范围：1.25~80mg/L

反应时间：样本结合 55min，酶结合物 30min，显色 14min，全程 99min

保存条件：2~8℃避光储存，微孔板铝箔袋密封防潮

显色系统：HRP-TMB 显色，稀硫酸终止

检测波长：450nm 主波长，630nm 参比校正

标准曲线绘制：倍比稀释 8 个梯度，多项式拟合标准曲线

注意事项：高浓度样本务必做梯度稀释，防止钩状效应结果偏低
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

血清样本梯度稀释：待测血清用配套稀释液做倍数稀释，轻柔颠倒混匀，室温静置 6min；试剂室温放置 25min 平衡温度。

微孔加样封板孵育：每孔加入标准品、稀释血清与酶工作液，封板膜封口，37℃孵育 55min。

洗涤微孔：弃净废液，洗涤液注满浸泡 30s，洗板 4 次，彻底拍干微孔液体。

底物显色：加入显色 A、B 液，避光震荡混匀，37℃显色 12min。

终止显色：加入终止液终止反应，轻微晃动酶标板混匀。

读取吸光值：酶标仪 450nm 检测各孔 OD 值并记录。

浓度核算：标准曲线计算稀释后含量，换算稀释倍率得出血清 HSA 实际浓度。