本试剂盒运用经典双抗体夹心酶联免疫吸附检测原理，将特异性识别人人足细胞标记蛋白（PCX）的抗体包被于酶标板微孔表面。检测体系中，样本及标准品中的PCX抗原与固相包被抗体发生特异性免疫结合，洗孔去除未结合的杂质蛋白与体液成分后，加入HRP标记的PCX检测抗体，形成稳定的免疫夹心复合物。后续加入TMB底物进行酶促显色反应，显色深浅与样本中PCX含量成正比，经终止液终止反应后，利用酶标仪检测对应波长吸光度，对照标准曲线即可精准定量样本中足细胞标记蛋白的浓度。
基本参数：
产品名称：人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒
英文名称：PCX Elisa Kit
货号：Y-E238
规格：48T/96T
灵敏度：最小检出值 0.08ng/mL
检测范围：0.2ng/mL～25ng/mL
反应时间：样本室温孵育 75min，酶标二抗 50min，底物避光显色 12min，终止读数，合计 137min
保存条件：试剂盒全程 2～8℃避光；剩余微孔板条放入自封袋加干燥剂密封冷藏，有效期内用完，不可室温久置
显色系统：可溶性 TMB 显色底物，酸性终止液终止显色
检测波长：450nm 为主，620nm 作为校正波长
标准曲线绘制：8 个梯度标准品浓度，使用 Origin 软件四参数拟合曲线，剔除异常孔数值后拟合
注意事项：尿液样本需过滤去除细胞杂质；所有耗材无蛋白污染，防止本底 OD 值升高；终止液具有腐蚀性，避免皮肤直接接触。
通用注意事项：
样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：
提前 28min 取出试剂盒解冻回温，稀释浓缩洗液，梯度稀释 PCX 标准品并做好标记。
酶标板分区加样：标准品梯度孔、待测血清 / 组织上清样本孔、空白孔，垂直加样防止孔壁挂液。
一步添加酶标记一抗工作液，覆膜封口，置于 37℃恒温孵育箱避光反应 55min。
去封膜，甩干孔内液体，洗板 6 轮，每次注满洗涤液静置 30s，彻底拍干微孔。
加入 TMB 显色液，室温避光静置显色 18min，观察标准孔梯度蓝色区分度。
每孔滴加终止液终止催化反应，震荡酶标板 5~10 秒混匀体系。
450nm 波长测定吸光度，绘制标准曲线，计算样本中 PCX 蛋白浓度。
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