人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白(CVL)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，预先将纯化的人CVL特异性抗体包被于96孔微孔板中，形成固相抗体，向微孔中依次加入标准品、待测样本，样本中的CVL抗原会与固相抗体特异性结合，充分洗涤去除未结合的杂质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，形成固相抗体-抗原-酶标抗体复合物，再次洗涤洗去游离酶标抗体，加入底物显色液进行显色反应，在酸性终止液终止反应后，通过酶标仪测定各孔吸光度（OD值），OD值与样本中人CVL含量呈正相关，结合标准曲线即可计算出样本中CVL的浓度。
基本参数‌：

产品名称：人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白(CVL)ELISA试剂盒

英文名称：CVL ELISA Kit
货号：Y-E2980

规格：48T/96T

灵敏度：最低可检测量 0.15ng/mL

检测范围：0.312-20ng/mL

反应时间：样本孵育 90min，洗涤后二抗孵育 60min，显色避光 15min，终止后立即读数

保存条件：未开封试剂盒 2-8℃避光保存；开封后板条密封 2-8℃，显色液 A/B 避光单独冷藏，有效期 6 个月

显色系统：TMB 双组分显色液，HRP 酶促底物显色

检测波长：主波长 450nm，参比波长 630nm

标准曲线绘制：以标准品浓度为横坐标，对应 OD 值为纵坐标，采用四参数 Logistic 拟合生成标准曲线，代入样本 OD 值换算浓度

注意事项：CVL 易吸附于塑料管壁，样本稀释全程使用低吸附离心管；显色步骤严格避光，超时显色会造成结果偏高
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。
实验步骤如下：

取出试剂盒室温平衡 30min，设置空白孔、标准品孔、待测样品孔，每孔预先加入一步法酶结合工作液 50μL。

标准品孔依次加入梯度稀释 CVL 标准品 50μL，样品孔加入稀释后待测样本 50μL，空白孔仅加等量稀释液，封板膜封板。

37℃恒温孵育 60min，弃去孔内全部液体，洗板机洗板 5 次，每次浸泡 30s，拍干孔内残留液体。

每孔加入显色底物 A 液 50μL、显色底物 B 液 50μL，轻柔震荡混匀。

避光 37℃显色 15min，肉眼可见标准品孔出现明显蓝色梯度即可终止反应。

每孔快速加入终止液 50μL，孔内液体由蓝转为黄色，终止显色。

酶标仪 450nm 波长测定各孔 OD 值，根据标准品曲线计算样本 CVL 浓度。
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