人胰岛素受体底物2(IRS-2)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，微孔板固定有抗人IRS-2特异性单克隆抗体，作为固相捕获载体，加入梯度标准品和待测细胞、血清样本，样本中的IRS-2抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除非特异性结合组分，加入酶标记IRS-2检测抗体构建免疫复合物，洗涤后显色、终止、测吸光度，结合标准曲线定量测定IRS-2的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：最小检出 0.08ng/mL

检测范围：0.312~20ng/mL

反应时间：样本结合 75min，酶标抗体 45min，显色 14min，合计 134min

保存条件：2~8℃避光存放，剩余板条密封防潮

显色系统：A+B 混合 TMB 显色体系

检测波长：450nm 为主，630nm 参比校正

标准曲线绘制：六组梯度浓度，Logistic 四参数回归绘图

注意事项：细胞裂解样本需去除沉淀杂质，防止堵孔干扰洗板
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

细胞裂解上清稀释：组织 / 细胞裂解上清稀释混匀，室温静置 10min；试剂室温平衡 31min。

一步加样孵育：各孔加入标准品、待测样本与酶结合试剂，封板 37℃孵育 67min。

洗板除杂：洗涤液浸泡 40s，洗板 5 次，彻底拍干微孔内液体。

底物显色：加入显色液避光震荡混匀，37℃显色 16min。

终止反应：加入终止液终止显色体系。

仪器读取 OD：450nm 检测吸光度并归档数据。

浓度计算：标准曲线换算稀释倍数得到 IRS-2 检测结果。