人乙型肝炎病毒前S2抗原(HBV preS2Ag)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板预先包被HBV前S2特异性抗体，加入待测血清样本与梯度标准品，样本中的前S2抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除未结合杂质，加入酶标记前S2抗原检测抗体形成免疫复合物，洗涤纯化体系后显色、终止反应，检测吸光度并通过标准曲线定量检测抗原含量。
产品参数：

‌灵敏度：检出限 8pg/mL

检测范围：32~2048pg/mL

反应时间：样本结合 60min，酶结合物 45min，显色 15min，总 120min

保存条件：2~8℃避光，底物液禁止长时间敞口放置氧化失效

显色系统：单液 TMB 显色盐酸终止

检测波长：450nm 检测吸光度，650nm 扣除背景

标准曲线绘制：五点位标准品，线性回归构建曲线公式

注意事项：重度溶血样本会破坏抗原表位，造成假阴性结果
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

血清样本稀释处理：乙肝感染者血清稀释混匀，室温静置 12min；试剂盒室温平衡 33min。

加样密封孵育：空白、标准、样本孔加入标准品、血清样本与酶标记液，覆膜封口，37℃孵育 69min。

洗板去除非特异结合：洗涤液浸泡微孔 40s，洗板 5 次，彻底拍干微孔废液。

避光显色：加入显色底物液混匀，37℃避光显色 17min。

终止显色：滴加终止液终止反应并摇匀。

酶标仪测 OD：450nm 检测各孔吸光度逐条记录。

结果判读定量：设定阈值判定阴阳性，标准曲线计算抗原浓度。