本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理,酶标板微孔固相固定有抗小鼠丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1)特异性抗体。检测过程中,样本与标准品中的PDH E1抗原与固相抗体特异性结合,洗去未结合的游离成分后,加入辣根过氧化物酶标记的配对检测抗体,构建固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。充分洗涤后加入TMB底物显色,酶促反应的显色深浅与样本中PDH E1含量成正比,终止反应后测定吸光度,依据标准曲线可精准计算样本中目标蛋白的含量。
基本参数:

产品名称:小鼠丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1) ELISA试剂盒
英文名称:PDH E1 ELISA Kit
货号:Y-E2202
规格:48T/96T
灵敏度:检出下限 0.10ng/mL
检测范围:0.22ng/mL~38ng/mL
反应时间:样本 37℃孵育 78min,酶标记物 46min,显色 16min,终止后立即测值,总时长 140min
保存条件:试剂盒 2~8℃储存,严禁冷冻;酶结合物冻融一次即报废
显色系统:双液混合 TMB 显色
检测波长:450nm 单波长
标准曲线绘制:六组标准浓度,线性拟合标准曲线,剔除偏离值后计算
注意事项:线粒体提取样本避免氧化降解;操作全程尽量避光。
通用注意事项:

样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下:

试剂盒室温放置 33min 回温,稀释洗涤液,配制 PDH E1 梯度标准溶液。
酶标板添加标准品、小鼠细胞裂解样本、空白对照液,规范加样。
一步加入酶结合工作液,密封封板,37℃避光孵育 72min。
弃液洗板 5 次,每次浸泡 30s,吸水纸拍干微孔。
显色混合液遮光显色 18min。
滴加终止液终止反应,混匀板面。
双波长测值,定量样本 PDH E1 表达量。
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