人鱼精蛋白1(PRM1)ELISA试剂盒

本试剂盒采用经典双抗体夹心ELISA原理，将高特异性人鱼精蛋白1抗体固定于酶标板微孔表面作为固相载体，加入标准品与待测样本后，样本中的PRM1抗原与固相抗体特异性结合，孵育平衡后洗板去除未结合物质，加入酶标记PRM1检测抗体，形成固相抗体- PRM1抗原-酶标抗体三元复合物，经底物显色、终止反应后，酶标仪读取各孔OD值，显色强度与样本中PRM1浓度成正比，依据标准曲线即可准确计算样本中目标蛋白的含量。
产品参数：

‌灵敏度：最低检出值 0.09ng/L

检测范围：0.18ng/L - 12ng/L

反应时间：固相包被结合 35min，酶标二抗孵育 35min，显色反应 10min

保存条件：全套试剂 2～8℃保存，终止液常温密封可存放 6 个月

显色系统：改良型 TMB 稳定显色液，无需现配

检测波长：450nm，建议 570nm 作为校正波长

标准曲线绘制：梯度标准品做复孔检测，取均值后拟合非线性标准曲线

注意事项：精液样本需充分液化后离心取上清检测，杂质易造成孔底沉淀
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

试剂室温平衡 30min，梯度稀释 PRM1 标准品，精液上清待测样本用试剂盒稀释液稀释，标注酶标板标准、样本、空白孔。

按既定加样体积分别向对应孔添加标准品、待测样本、空白稀释液，加样避免触碰酶标板孔壁包被层。

一步法直接添加酶标记 PRM1 二抗工作液至全部微孔，水平摇晃酶标板 15s 混匀体系。

密封封板，37℃湿盒孵育 60min，全程避光放置，防止酶标抗体失活。

弃掉孔内液体，洗板液洗板 5 次，每次浸泡 30s，倒扣在吸水纸上彻底拍干残留洗液。

避光加入显色底物 AB 液混合液，37℃避光显色 14min，观察梯度显色区分度。

加入终止液终止反应，450nm 波长读取 OD 值，绘制标准曲线，计算样本 PRM1 蛋白表达含量。