人原钙黏素1(PCDH1)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心免疫酶标技术原理，酶标板微孔包被纯化的人原钙黏素1特异性捕获抗体，加入待测样本和梯度标准品后，样本中的PCDH1抗原与固相捕获抗体特异性结合，孵育结束后洗涤除去未结合杂质，加入HRP标记的PCDH1检测抗体，形成稳定的免疫夹心复合物，后续通过底物催化显色、终止反应，利用酶标仪检测吸光度，结合标准曲线线性关系，定量检测样本中人原钙黏素1的表达含量。
产品参数：

‌灵敏度：检测限 0.27pg/mL

检测范围：0.54pg/mL - 35pg/mL

反应时间：第一步孵育 50min，第二步酶孵育 40min，显色 15min

保存条件：试剂盒 2-8℃，不可冻存；浓缩标本稀释液室温保存

显色系统：HRP 催化 TMB 显色，硫酸溶液终止

检测波长：450nm 参比 620nm

标准曲线绘制：以标准品稀释梯度对应 OD 值，Origin 软件四参数拟合曲线

注意事项：细胞上清样本需去除细胞碎片，离心后再上机检测
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

试剂盒室温静置 25min，配置 PCDH1 标准品系列浓度梯度，细胞上清样本稀释预处理，标记酶标板所有微孔用途。

空白孔加缓冲稀释液，标准品孔依次加不同浓度标准品，样本孔加入待测上清样本，精准控制每孔加样体积一致。

直接向全部微孔加入酶标记抗体工作液，无需预孵育洗板，手动轻晃酶标板混匀反应体系。

封板密封后 37℃避光孵育 70min，不可叠加放置酶标板影响受热均匀度。

废液倒出，洗板液每孔加满浸泡 28s，连续洗板 4 次，充分拍干微孔内液体。

避光添加 TMB 显色液，室温显色 16min，依据标准品颜色梯度确定终止时机。

终止液滴加终止显色，酶标仪 450nm 检测吸光值，通过标准曲线计算样本 PCDH1 浓度。