本试剂盒基于双抗体夹心ELISA原理制备,酶标板微孔包被有小鼠可溶性CD30(sCD30)特异性捕获抗体。检测过程中,样本、标准品中的sCD30抗原与固相抗体特异性结合,洗去游离杂质后,加入HRP标记的sCD30检测抗体,形成稳定的免疫夹心复合物。充分洗涤后加入TMB底物显色,酶促反应的显色深浅与样本中sCD30含量成正比,终止反应后通过酶标仪检测吸光度,依据标准曲线即可精准计算样本中目标蛋白的浓度。
基本参数:

产品名称:小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA试剂盒
英文名称:sCD30 ELISA Kit
货号:Y-E2076
规格:48T/96T
灵敏度:检出下限 0.06ng/mL
检测范围:0.13ng/mL~32ng/mL
反应时间:37℃孵育样本 82min,酶标二抗 49min,底物显色 18min,终止检测,合计 149min
保存条件:试剂盒 2~8℃冷藏;拆封板条放入自封袋加干燥剂密封
显色系统:单组份稳定 TMB 显色液
检测波长:450nm
标准曲线绘制:四参数拟合标准曲线,标准品设置双复孔取平均值
注意事项:细胞培养上清过滤后再检测;避免强光直射微孔板影响显色。
通用注意事项:

样本要求
血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸;组织匀浆充分离心去除沉淀;样本分装冻存,反复冻融≥3 次会导致抗原降解,检测值偏低。
温度控制
孵育温度严格 37℃,温箱温度波动、室温过低会降低结合效率,背景升高、重复性变差。
避光操作
TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化,显色全程避光,试剂避光存放。
洗板规范
洗涤不充分会造成高背景、假阳性;拍干时使用干净吸水纸,禁止交叉污染微孔。
污染防控
实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶;枪头一次性更换,标准品与样本避免交叉加样;底物液变色、出现沉淀不可使用。
安全防护
终止液含稀硫酸,具有腐蚀性,避免接触皮肤、黏膜;实验废液集中收集中和后处理,不可直接倾倒。
失效判定
试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异,均判定失效,禁止继续实验。
稀释校正
样本 OD 值高于最高标准孔时,必须稀释重测,最终结果乘以稀释倍数;低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。
空白对照
空白孔吸光度应极低,若空白孔 OD>0.1,说明洗涤不充分或试剂污染,实验作废重做。
储存禁忌
试剂盒不可冷冻结冰,冷冻会造成酶标抗体蛋白变性,直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下:

试剂盒室温平衡 36min,稀释浓缩洗涤液,梯度稀释 sCD30 标准品。
酶标板分孔加入标准品、待测体液样本、空白稀释液。
一步加入酶偶联检测液,封板 37℃避光孵育 66min。
洗板 5 次,每次浸泡 28s,倒扣拍干微孔。
遮光条件下显色 17min。
加入终止液终止反应,混匀板面液体。
酶标仪测 OD 值,换算 sCD30 浓度。
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