测定意义:
胰α-淀粉酶与α-葡萄糖苷酶是人体碳水化合物消化吸收通路中的核心级联酶系,二者上下游协同,共同决定餐后血糖的生成速率与峰值水平:胰α-淀粉酶主要由胰腺分泌,作用于淀粉、糖原等多糖的内部α-1,4糖苷键,将大分子多糖快速水解为麦芽寡糖、糊精等中间产物,是碳水化合物消化的第一步限速环节;α-葡萄糖苷酶分布于小肠黏膜刷状缘,作用于寡糖的非还原末端α-1,4糖苷键,将淀粉酶产生的寡糖进一步水解为可被肠道直接吸收的葡萄糖,是餐后葡萄糖释放的终末关键酶。
双酶同筛的核心意义:1.同时筛选针对两种酶的抑制剂,可从碳水化合物水解的双重节点阻断葡萄糖生成,相比单酶抑制(如单用α-葡萄糖苷酶抑制剂),降糖幅度更大、餐后血糖波动更平缓,是研发抗糖尿病药物、减肥功能食品、控糖膳食补充剂的核心筛选模型;2.本试剂盒采用经典的CNPG3法(胰α-淀粉酶)与PNPG法(α-葡萄糖苷酶),方法学稳定、重复性好、灵敏度高,可实现双靶点抑制剂的同步高通量筛选,大幅提升降糖活性物质的筛选效率,为糖代谢相关疾病的干预产品研发提供可靠的体外评价工具。
测定原理:
胰α-淀粉酶的测定采用底物显色法,胰α-淀粉酶与底物2-氯-4-硝基苯基-α-D-吡喃麦芽三糖苷(CNPG3)反应即可释放显色产物CNP,该产物在405 nm波长下有特征吸收峰。加入待测抑制剂后,酶的活性受阻,产物生成速率降低。通过比较阴性对照管(无抑制)与测定管(含抑制剂)的吸光值,即可计算胰α-淀粉酶的抑制率,从而判断样品的抑制活性水平。
α-葡萄糖苷酶采用对硝基苯酚比色法,通过检测α-葡萄糖苷酶作用下产生的有色产物来评估酶的活性。在碱性条件下,反应产物对硝基苯酚会迅速转化为黄色的对硝基苯酚盐。该黄色产物的吸光度在400 nm波长处具有特征吸收,其吸光值与体系中产生的对硝基苯酚量成正比。
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