该试剂盒聚焦异源曼氏杆菌的分子检测,基于该菌株独特的基因序列构建专属PCR扩增体系,可精准区分异源曼氏杆菌与其他常见曼氏杆菌及致病菌。试剂盒特异性强、无交叉反应,灵敏度可达微量核酸检出水平,能够有效检出低载量感染样本,适用于畜禽疑难感染病例病原鉴定、养殖环境病原溯源及菌种分型检测。
产品名称
异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒
货号
YS-P014403
英文名称
Mannheimia varigenaPCR
规格
50T
有效期
12个月
保存
-20℃保存
基础原理:
组织样本去除宿主蛋白杂质后提取细菌 DNA,引物靶向异源曼氏杆菌独有间隔基因扩增。
探针荧光定量体系,探针仅与异源曼氏杆菌扩增序列互补结合,无靶标则无荧光释放。
梯度退火温度优化引物结合特异性,避免与同属曼氏杆菌发生非特异性结合。
操作步骤:
1. 样本处理
提取待测样本RNA,建议使用商品化RNA提取试剂盒。
2. 阳性对照稀释(示例:6个梯度)
标记离心管(7至2号),每管加入45μL模板稀释液。
按10倍梯度稀释阳性对照,避免交叉污染。
3. PCR反应体系配制(20μL/反应)
| 组分 | 体积(μL) |
| RT-PCR反应液 | 10 |
| 荧光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 补至20 |
4. 上机程序
逆转录:50℃ 15分钟(可选,根据病毒RNA特性调整)。
预变性:95℃ 2分钟。
循环:95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号),共40循环。
注意事项:
避免反复冻融试剂,解冻后需充分混匀。
实验环境需严格分区(试剂准备区、样本处理区、扩增区),防止污染。
阳性对照需与样本分装操作。
本产品仅限科研用途,不可用于临床诊断。
操作时需穿戴防护装备,避免试剂接触皮肤或眼睛。
样本采集需遵循无菌原则,运输时使用干冰或冰袋保存。
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