本试剂盒专为黑色普雷沃菌核酸检测研发，依托菌种特异性保守基因设计扩增引物，可专一性检测黑色普雷沃菌核酸，精准鉴别该菌种引发的各类厌氧感染病症。试剂盒反应体系优化完善，可耐受复杂样本基质干扰，检测结果稳定、准确率高。适用于畜禽厌氧性炎症、组织感染病例的病原确诊、养殖环境致病菌监测、微生物菌种鉴定及相关疫病防控研究。
产品名称 | 黑色普雷沃菌PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P014632 |
英文名称 | Prevotella melaninogenicaPCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
对口腔病灶样本进行菌体裂解，提取基因组 DNA 并纯化。
引物靶向黑色普雷沃菌特异性毒力基因，避免与其他口腔厌氧菌交叉反应。
根据扩增曲线有无有效信号判断该致病菌是否存在。
操作步骤：
样本制备：
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制（20 μL体系示例）：
预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特异性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。
注意事项：
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区，各区实验服、移液器及耗材严禁混用，防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头，每步更换枪头；
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；
加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存，避免反复冻融，确保稳定性；
使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。
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