产品名称：牛巴氏杆菌PCR检测试剂盒
英文名称：Bovine Pasteurella spp. PCR Detection Kit
货号：YS-P015148
分类：PCR检测试剂盒
规格：50T/盒
检测原理：
牛鼻拭子提取巴氏杆菌 toxA 毒素基因 DNA，荧光 PCR 扩增筛查呼吸道致病菌。
靶向巴氏杆菌特异性 ompH 外膜蛋白基因，循环放大微量菌体核酸。
探针仅结合巴氏杆菌保守基因，扩增产生荧光曲线区分牛其他呼吸道细菌。
实验流程：
样本制备：
使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。
建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反应体系配制（20 μL体系示例）：
预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特异性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
补充无核酸酶水至终体积。
PCR扩增程序：
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。
结果判读：
阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；
阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；
可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。
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注意事项：
所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；
阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；
试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；
废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；
试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；
移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。
关键字： 牛巴氏杆菌;PCR检测试剂盒;
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