产品名称：人E-选择素GT基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)
英文名称：Human E-selectin GT Gene Polymorphism Detection Kit (PCR-RFLP)
货号：YS-P015192
分类：PCR检测试剂盒
规格：50T/盒
检测原理：
PCR 扩增 E - 选择素 GT 多态位点所在基因片段，限制性内切酶识别特定碱基序列，酶切产物电泳条带区分 GG、GT、TT 基因型。
引物靶向 E - 选择素启动子 GT 突变区域，不同基因型扩增片段酶切后分子量存在明显差异，肉眼区分电泳条带判定分型。
配套酶切缓冲体系避免非特异性切割，仅靶标扩增片段发生酶切反应，排除样本杂质干扰分型结果。
实验流程：
1. DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。
3. PCR反应体系配制（试剂配制区）
按以下比例配制（示例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
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注意事项：
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区，各区实验服、移液器及耗材严禁混用，防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头，每步更换枪头；
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；
加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存，避免反复冻融，确保稳定性；
使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。
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