本试剂盒采用逆转录荧光定量RT-PCR技术，靶向猪传染性胃肠炎病毒RNA保守序列设计体系，可实现病毒核酸的精准定量检测。试剂盒可完成病毒RNA逆转录与实时荧光扩增，既能定性判定病毒感染，又能精准测定病毒载量，灵敏度高、定量精准、重复性好，适用于猪群传染性胃肠炎早期诊断、感染程度评估、猪场疫情监测及抗病毒效果评价。
产品名称 | 猪传染性胃肠炎病毒定量RT-PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P015333 |
英文名称 | Quantitative RT-PCR Detection Kit for Swine Transmissible Gastroenteritis Virus | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
提取病料中病毒 RNA，逆转录合成 cDNA 作为荧光定量扩增模板。
荧光探针靶向病毒核蛋白基因，扩增过程实时释放荧光实现载量定量。
根据荧光 Ct 值计算病毒核酸拷贝数，判定病毒感染载量高低。
操作步骤：
DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。
标准曲线制备（样本制备区）
标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。
梯度稀释阳性对照：
7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；
依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。
所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。
试剂配制（试剂准备区）
反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。
每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。
加样（样本处理区）
分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。
盖紧管盖，避免气泡干扰。
PCR扩增（核酸扩增区）
按以下程序运行定量PCR仪：
预变性：95℃ 2分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；
熔解曲线分析（可选）。
注意事项：
分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染
无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服
试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心
避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作
防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台
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