产品名称:猪痢疾蛇形螺旋体(SH)核酸检测试剂盒
英文名称:Brachyspira Hyodysenteriae (SH) Nucleic Acid Detection Kit
货号:YS-P015405
分类:核酸检测试剂盒
规格:50T/盒
检测原理:
采用实时荧光定量 PCR(qPCR)技术,针对 SH 特异性保守基因设计一对特异性引物与 TaqMan 荧光探针,样本中螺旋体核酸经提取纯化后,在 Taq 酶作用下完成靶基因扩增,探针与扩增产物结合后释放荧光信号,仪器实时捕捉荧光强度,依据 Ct 值判定样本是否携带目标菌核酸。
双重引物扩增法,筛选 SH 独有的毒力基因片段作为扩增靶点,排除猪肠道其他共生螺旋体交叉扩增干扰,扩增体系内置内参基因,同步监控核酸提取、扩增全过程是否存在抑制物,避免假阴性结果。
磁珠法核酸提取结合荧光 PCR 一体化原理,磁珠ბผბ
实验流程:
1. 样本处理
提取待测样本RNA,建议使用商品化RNA提取试剂盒。
2. 阳性对照稀释(示例:6个梯度)
标记离心管(7至2号),每管加入45μL模板稀释液。
按10倍梯度稀释阳性对照,避免交叉污染。
3. PCR反应体系配制(20μL/反应)
| 组分 | 体积(μL) |
| RT-PCR反应液 | 10 |
| 荧光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 补至20 |
4. 上机程序
逆转录:50℃ 15分钟(可选,根据病毒RNA特性调整)。
预变性:95℃ 2分钟。
循环:95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集荧光信号),共40循环。
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注意事项:
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域:试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区,各区实验服、移液器及耗材严禁混用,防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头,每步更换枪头;
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行,避免污染其他试剂;
加样后立即盖紧管盖,避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存,避免反复冻融,确保稳定性;
使用前于冰上解冻并轻柔混匀,瞬时离心后使用。
关键字: 猪痢疾蛇形螺旋体;SH;核酸检测试剂盒;
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