本试剂盒基于特异性PCR扩增技术，针对猪痢疾短螺旋体专属基因序列设计引物探针，可精准检测猪粪便、结肠黏膜组织、肠道分泌物样本中的病原菌核酸。该菌是猪痢疾、黏液出血性下痢的核心致病菌，试剂盒灵敏度高，可实现早期无症状感染筛查，特异性强，可区分其他肠道短螺旋体。适用于规模化猪场猪痢疾防控、临床病例确诊、引种检疫及猪场肠道病原菌净化工作。
产品名称 | 猪痢疾短螺旋体PCR检测试剂盒 | 货号 | YS-P013950 |
英文名称 | Brachyspira hyodisenteriaePCR | 规格 | 50T |
有效期 | 12个月 | 保存 | -20℃保存 |
基础原理：
提取猪结肠黏膜细菌 DNA，qPCR 靶向短螺旋体毒力 tlyA 基因，荧光探针特异性检出致病猪痢疾短螺旋体。
普通 PCR 扩增螺旋体 16S rRNA 特异性基因，电泳条带阳性确诊猪痢疾病原。
磁珠纯化粪便微量细菌 DNA 后巢式 PCR，大幅降低粪便杂质对扩增的抑制作用。
操作步骤：
1. DNA提取（样本制备区）
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 标准曲线制备（独立操作区）
标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。
3. PCR反应体系配制（试剂配制区）
按以下比例配制（示例）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上机检测
程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。
注意事项：
1、实验分区管理
实验全程需严格划分三个独立区域：试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区，各区实验服、移液器及耗材严禁混用，防止交叉污染。
2、防止污染操作
使用带滤芯枪头，每步更换枪头；
阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；
加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。
3、试剂保存与使用
所有试剂需-20℃避光保存，避免反复冻融，确保稳定性；
使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。
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